螢光物質特性的光譜包括激發光譜和螢光光譜兩種。在分光光度法中，被測物質只有一種特徵的吸收光譜，而螢光分析法能測出兩種特徵光譜，因此，鑑定物質的可靠性較強。當然，必須在標準品對照下進行定性。
基本介紹
- 中文名：螢光物含量測定方法
- 方法：定性和定量
- 包括：激發光譜和螢光光譜
- 特點：可靠性較強
螢光分析法的定量測定方法較多，可分為直接測定法和間接測定法兩類。
a.直接測定法：
利用螢光分析法對被分析物質進行濃度測定，最簡單的便是直接測定法。某些物質只要本身能發螢光，只須將含這類物質的樣品作適當的前處理或分離除去干擾物質，即可通過測量它的螢光強度來測定其濃度。具體方法有兩種。
1. 直接比較法：配製標準溶液的螢光強度Fx，已知標準溶液的濃度Cs，便可求得樣品中待測螢光物質的含量。
如果空白溶液的螢光強度調不到零，則必須從Fs和Fx值中扣除空白溶液的螢光強度F0，然後進行計算。
2. 標準曲線法：將已知含量的標準品經過和樣品同樣處理後，配成一系列標準溶液，測定其螢光強度，以螢光強度對螢光物質含量繪製標準曲線。再測定樣品溶液的螢光強度，由標準曲線便可求出樣品中待測螢光物質的含量。
為了使各次所繪製的標準曲線能重合一致，每次應以同一標準溶液對儀器進行校正。如果該溶液在紫外光照射下不夠穩定，則必須改用另一種穩定而螢光峰相近的標準溶液來進行校正。例如，測定維生素B1時，可用硫酸奎寧溶液作為基準校正儀器。
b、間接測定法：
有許多物質，它們本身不能發螢光，或者螢光量子產率很低，僅能顯現非常微弱的螢光，無法直接測定，這時可採用間接測定方法。
間接測定方法有以下幾種：
1.化學轉化法：通過化學反應將非螢光物質變為適合於測定的螢光物質。例如金屬與螯合劑反應生成具有螢光的螯合物。有機化合物可通過光化學反應、氧化還原、偶聯、縮合反等應，使它們轉化為螢光物質。
2.螢光猝滅法：這種方法是利用本身不發螢光的被分析物質能使某種螢光化合物的螢光猝滅的性質，通過測量螢光化合物螢光強度的下降，間接地測定該物質的濃度。
3.敏化發光法：對於很低濃度的分析物質，如果採用一般的熒s光測定方法，其螢光信號太弱而無法檢測，可使用一種物質（敏化劑）以吸收激發光，然後將激發光能傳遞給發螢光的分析物質，從而提高被分析物質測定的靈敏度。
