基本介紹
- 中文名：QPCR
- 外文名：Real-time Quantitative PCR Detecting System
- 又名：實時定量基因擴增螢光檢測系統
- 特點：所用儀器少，只用一台儀器等
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關係
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction簡稱PCR）原理憑藉敏感、特異、快速的特點榮獲93年諾貝爾化學獎。因其在病原體檢測方面的獨特優勢，因而已開發國家在相關方法和儀器方面的研發非常快，成為分子生物學診斷的主流，至今仍處於學術和套用前沿。
產品
第一代產品：
基因擴增熱循環儀（DNA Thermal Cycler）+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑，構成PCR定性檢測。
第二代產品：
基因擴增熱循環儀+螢光儀+終點定量試劑，構成PCR-DNA終點法定量檢測（End-point quantitative PCR detection），又分為終點酶免定量（ End-point ELISA-PCR）和終點螢光定量（End-point Fluor-PCR）兩種。
第三代產品：
實時定量QPCR儀+實時螢光定量試劑，構成QPCR-DNA/RNA實時螢光定量檢測。
特點
QPCR至少有以下特點：
所用儀器少，只用一台儀器。
檢測時間短，只須45分鐘～1小時10分鐘（試劑各異），而定性PCR須3～4小時，酶免終點定量須6～8小時，螢光終點定量須2～3小時。
操作極其簡單：前處理後，樣本插入儀器一小時後到電腦上來出報告即可，無須開蓋，移樣本（以前方法），避免污染。
結果精確：定性PCR只能定性，很粗略，終點定量PCR由於只能在40個熱循環結束後檢測螢光，被測螢光達到飽和導致定量不夠精確，屬於半定量狀態。而實時螢光QPCR是在擴增的每時每刻連續檢測各樣本的螢光值的變化，如圖一所示：
圖一 西安天隆TL988實際曲線1
檢測動態範圍：10～10000000000 DNA copies/ml
檢測精度：0.1RLU
辨別率：5000和10,000個模板拷貝樣本的辨別率99.7%。
現狀
實時螢光QPCR是當今世界用於臨床的最先進核酸分子診斷技術，被美國FDA承認並推崇，被美國FDA批准並取得臨床套用執照的QPCR試劑品種有：
B肝病毒（HBV），C肝病毒（HCV），愛滋病病毒（HIV），沙眼衣原體Chlamydi trachomatis（CT），性傳播疾病，淋病雙球菌Neiserria gonorrhea(NG)，巨細胞病毒Cytomegalovirus（CMV），呼吸道疾病，結核分支桿菌Mybobacterium tuberculosis（Mtb）等。
