蛋白質等電點

特性

蛋白質在溶液中有兩性電離現象。假設某一溶液中含有一種蛋白質。當pI=pH時該蛋白質極性基團解離的正負離子數相等，淨電荷為0，此時的該溶液的是pH值是該蛋白質的pI值。某一蛋白質的pI大小是特定的，與該蛋白質結構有關，而與環境pH無關。

在某一pH溶液中當pH>pI時該蛋白質帶負電荷，反之pH<pI時該蛋白質帶正電荷，pH=pI時該蛋白質不帶電荷。人體內pH=7.4；而體內大部分蛋白質的 pI<6；所以人體內大部分蛋白質帶負電荷。

主要套用

在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子淨電荷為零(即正負電荷相等)，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉澱，所以蛋白質在等電點時，其溶解度最小，最易形成沉澱物。等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小，從而有利於懸浮液的過濾。在等電點外的所有其他pH值，依據蛋白質所帶淨電荷採用電泳和離子交換層析來分離和分離純化該蛋白質。

等電點沉澱主要套用於蛋白質等兩性電解質的分離提純，還可套用於大豆異黃酮的分離：用等電點沉澱法脫去蛋白質，可提高異黃酮製品的純度，異黃酮截留率為7.2%，蛋白質截留率為91.1%。

大豆蛋白質在pH4.5左右達到等電點，此時其溶解度最低形成沉澱，利用這個性質來提取大豆分離蛋白，使大豆分離蛋白從提取液中聚沉下來，與其他可溶性物質分離。大豆分離蛋白不是在所有酸性條件下都沉澱，只有在等電點附近才沉澱，當pH調太低時溶解度反而升高，到pH2.5時，已沉澱的蛋白質就會幾乎全部重新溶解，因此必須嚴格掌握酸沉所需的pH，才能有滿意的效果。在分離中，大量的含磷化合物的存在是影響蛋白質提取的較大因素，最好除去植酸，可用透析法，也可根據蛋白質和植酸的溶解度的差異性將其除去。

大豆分離蛋白的一般工藝是用50℃溫水萃取並離心，把豆渣用50℃溫水和NaOH調整pH9進行二次萃取，並離心分離把分離出的豆漿進行酸沉，同時攪拌（60r/min），加入2%消泡劑和溫水，加入適量亞硫酸鈉調pH7左右，進行高速攪拌（120r/min）並加入3.5%HCL調至pH4.5，此時蛋白質在等電點開始沉澱，並經過一系列的工藝凝乳分離、均質、中和、殺菌乾燥得成品。

測定方法

●方法：平板等電聚焦

●原理：蛋白質分子在含有載體兩性電介質形成的連續而穩定的線性pH梯度中進行電泳。按照等電點不同被分離，形成一個很窄的區帶

●儀器：Bio-Rad Model 111Mini IEF Cell

●樣品要求：

●液體：濃度>3mg/ml；體積>200ul；固體：質量>200ug

●樣品純度>90%；含鹽量<3 0mM；分子量：一般要求大於1000Da

●常見影響測試情況:

1、蛋白質純度不足

2、含鹽量過高

蛋白質等電點

基本介紹

特性

主要套用

測定方法

計算方法

參考值

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