基本介紹
- 中文名:穿梭型載體
- 含義:指含有兩個親緣關係不同的複製子,能在兩種不同的生物中複製的載體
- 套用:細菌中用於克隆,擴增克隆的基因,在酵母菌中用於基因表達分析
穿梭型載體是指含有兩個親緣關係不同的複製子,能在兩種不同的生物中複製的。例如既能在原核生物中複製,又能在真核生物中複製的載體。這類載體不僅具有細菌質粒的複製原點及選擇標記基因,還有真核生物的自主複製序列(ARS)以及選擇...
酵母質粒載體是基因表達載體的一種,既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行複製與擴增,所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我複製載體兩類。①整合載體:它帶有一個酵母URA3標誌基因和大腸桿菌的複製和報告基因。由於質粒DNA與酵母基因組DNA之間發生了同源重組,在轉化的細胞中可以檢測到質粒的整合複製。整...
酵母質粒載體 酵母質粒載體是基因表達載體的一種,既可以在大腸桿菌中、又可以在酵母系統中進行複製與擴增,所以也稱為穿梭載體。它分為整合載體和自我複製載體兩類。①整合載體:它帶有一個酵母URA3標誌基因和大腸桿菌的複製和報告基因。由於質粒DNA與酵母基因組DNA之間發生了同源重組,在轉化的細胞中可以檢測到質粒的...
除常用的大腸桿菌質粒載體外,近年來發展了許多人工構建的其它能用於微生物、酵母、植物等的質粒載體。含有不止一個ori、能攜帶插入序列在不同種類宿主細胞中繁殖的載體稱為穿梭載體(shuttle vectors)。噬菌體載體 簡介 噬菌體(phage)是感染細菌的一類病毒,有的噬菌體基因組較大,加入λ噬菌和T噬菌體等;有的則...
桿狀病毒穿梭載體 桿狀病毒穿梭載體是2000年公布的昆蟲學名詞。定義 桿狀病毒基因組經遺傳修飾後構建成既能感染昆蟲細胞,又能在大腸桿菌內增殖的複製子。出處 《昆蟲學名詞》。
除常用的大腸桿菌質粒載體外,還發展了許多人工構建的其它能用於微生物、酵母、植物等的質粒載體。含有不止一個ori、能攜帶插入序列在不同種類宿主細胞中繁殖的載體稱為穿梭載體(shuttle vectors)。分類 按複製形式 分為嚴緊型和鬆弛型複製。根據質粒DNA複製與宿主之間的關係或在宿主細胞的拷貝數的多少,可以將質粒分...
構建的shRNA真核表達載體或者mirshRNA真核表達載體,由於載體上均帶有LR同源重組臂,所以這些載體均可作為YRBIO腺病毒包裝系統中的穿梭載體使用。如果目的細胞質粒轉染效率較低,則可直接以這些載體為基礎包裝腺病毒,利用腺病毒感染目的細胞。基本簡介 YRBIO-shRNA表達系統 作為RNA干擾實驗的第一步,靶位點的選擇,...
在表達載體中引入嚴格調控的強啟動子,能夠使目的基因在低誘導物濃度條件下仍能表達。誘導方式通常為化學誘導和環境誘導。表達載體主要有自主複製質粒、整合質粒和噬菌體三種。第一代主要來自金黃色葡萄球菌、革蘭氏陰性菌,通過重組構成帶有雙抗性標誌的嵌合質粒被廣泛套用。第二代質粒載體是穿梭質粒,如大腸桿菌-枯草...
值得指出的是,沒有適用於克隆所有DNA片段的萬能λ噬菌體載體,必須根據據需要選擇合適的噬菌體載體。(3)人工染色體克隆載體 人工染色體克隆載體實際上是一種穿梭克隆載體,含有質粒克隆載體所必備的第一受體(大腸桿菌)源質粒複製起始位點,還含有第二受體(如酵母菌)染色體DNA著絲點、端粒和複製起始位點的序列,以及合適...
FADH2將兩個電子轉給可移動的電子載體Q,然後再轉給Q-細胞色素c氧化還原酶,進入電子傳遞鏈。從總體來看,甘油磷酸穿梭途徑使細胞中的NADH氧化,並線上粒體內膜中生成QH2。胞液中的NADH通過這一途徑轉換成QH2後氧化所產生的能量(1.5個ATP)比線粒體內NADH氧化能量(2.5個ATP)少。蘋果酸-天冬氨酸穿梭(...
另一部分則是含有T-DNA的微型質粒,它帶有目的基因和大腸桿菌及農桿菌複製的起始位點,實際上是一種分子質量較小的大腸桿菌和農桿菌的穿梭載體。雙元載體系統的構建的原理是Ti質粒上的Vir基因可以反式激活T-DNA 的轉移。原理 1.一般植物表達載體是成套使用的,一套中有兩個,一個是帶有可以供插入外源表達基因的...
腺病毒載體大多以5型(Ad5)、2型(Ad2)為基礎,新增了55型(Ad55),很多研究機構在研究當中,55型將比5型流行以及套用更具廣泛性。作用機制 典型的腺病毒載體系統如:穿梭質粒pCA13/腺病毒基因組質粒pBHG11/包裝細胞293細胞。pCA13/的HCMV IE啟動子-多克隆位點-SV40 AN(poly A)構成外源基因的表達盒,...
也就是說,YRp系列載體是酵母DNA片段插入大腸桿菌質粒構成,它同時含有大腸桿菌和酵母的自主複製基因,所以能在兩種細胞中存在和複製,是穿梭載體。YRp系列含有一個ARS基因片段,由於轉化後缺乏有效的分離,故在有絲分裂後質粒在母體細胞分布極多而子代分布較少,在遺傳方面不穩定。它屬於自我複製型酵母載體,在每次細胞...
慢病毒表達載體,即通常所說的穿梭載體,包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質粒可提供所有的轉錄並包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心...
捕捉外顯子的載體pETV—SD是一種反轉錄病毒穿梭載體(shuttle vector),即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母,細菌和哺乳動物細胞等進行複製的載體。外顯子捕捉 【exon trapping 】是構建一種載體,從其插入片段中識別和回收外顯子序列,從而克隆目的基因。外顯子捕捉(exon trapping) 是構建一種載體,從其插入片段...
外顯子捕捉(exon trapping)是構建一種載體,從其插入片段中識別和回收外顯子序列,從而克隆目的基因。捕捉外顯子的載體pETV-SD是一種反轉錄病毒穿梭載體(shuttle vector),即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母,細菌和哺乳動物細胞等進行複製的載體(見圖5—14)。因為凡是有內含子和外顯子的基因在轉錄後都要...
外顯子捕獲 外顯子捕獲(exon trapping) 是構建一種載體,從其插入片段中識別和回收外顯子序列,從而克隆目的基因。捕獲外顯子的載體pETV—SD是一種反轉錄病毒穿梭載體,即可在不同種生物中如大腸桿菌和酵母,細菌和哺乳動物細胞等進行複製的載體。因為凡是有內含子和外顯子的基因在轉錄後都要經過RNA剪接,這就...
酵母整合型質粒.(YIps)是指自我複製型酵母載YIP 載體(yeast integrative plasmid) 比較簡單,屬於穿梭質粒、自我複製型酵母載體。簡介 它含有4 個主要部分:1多克隆位點;2抗氨苄青黴素基因amp';3大腸桿菌複製原點;4尿嘧啶原養型基因URA3+',在酵母菌第V 染色體上有URA3+ 的同源順序,通過交換可將YIP 整合到第...
假設這是正確的話,在人為介入水平基因轉移之後,大量穿梭載體及特異人工遺傳物質的出現並釋放到實驗室之外後,是否會出現水平基因轉移的第二次大爆發呢?在距今20億年至10億年之間,三域生物之間發生了大量的水平基因轉移事件。認為現代真核生物的核(nu)來自於古細菌,線粒體(mi)和葉綠體(ch)來自真細菌。同時還發生...
實施例3、cru1Ah全長基因穿梭載體的構建 為了便於克隆和表達,根據cry1Ah1基因編碼區全長核苷酸序列,設計了一對分別含有BamHI和SalI酶切位點的特異性引物。PCR擴增條件為94℃1分鐘,54℃1分鐘,72℃3分鐘,32個循環,72℃延伸10分鐘,採用高保真性能的pfu聚合酶進行擴增。獲得了3.5kb cry1Ah全長片段,如附圖7...
方案4 兩步BAC工程:穿梭載體DNA的製備 242 方案5 A同源臂(A-Box)和B同源臂(B-Box)的製備 244 方案6 克隆A和B同源臂到穿梭載體 247 方案7 重組穿梭載體的製備和檢驗 249 方案8 通過電穿7L法轉化重組穿梭載體到感受態BAC宿主細胞 251 方案9 共合體的檢驗和重組BAC克隆的篩選 253 方案10 一步BAC修飾:質粒...
利用此法成功構建了高拷貝大腸桿菌-枯草桿菌穿梭載體,為下一步天蠶素CAD的合成打下了堅實基礎。他們在啟動子和高效Tat分泌途徑信號肽篩選中利用青黴素醯化酶(PGA)作為報告蛋白,通過枯草桿菌168菌株基因組的序列分析,對可能具有Tat分泌途徑的28個信號肽進行篩選,成功得到了1個非誘導型強啟動子和3個高效Tat途徑分泌...
所採用的載體種類十分廣泛, 包括Fosmid、Cosmid、BAC、λ噬菌體以及各種穿梭載體, 所採用的宿主系統為常用的大腸桿菌、鏈黴菌和假單胞菌等。通過宏基因文庫篩選得到的生物分子大多數與已知的基因產物相似性差或者完全是新的分子, 這些新的生物分子主要來源於環境未培養微生物的基因和其多樣的代謝物。環境樣品DNA 的...
8.1.3減少泛素依賴型蛋白降解作用的突變宿主菌205 8.1.4內源性蛋白酶缺陷型的突變宿主菌206 8.2酵母菌的載體系統206 8.2.1釀酒酵母的2μ環狀質粒206 8.2.2乳酸克魯維酵母的線型質粒208 8.2.3果蠅克魯維酵母的環狀質粒208 8.2.4含ARS的YRp和YEp209 8.2.5含CEN的YCp210 8.2.6穿梭載體211 8.3...
7.1.3減少泛素依賴型蛋白降解作用的突變宿主菌164 7.1.4內源性蛋白酶缺陷型的突變宿主菌165 7.2酵母菌的載體系統166 7.2.1釀酒酵母的2μ環狀質粒166 7.2.2乳酸克魯維酵母的線型質粒167 7.2.3果蠅克魯維酵母的環狀質粒168 7.2.4含ARS的YRp和YEp169 7.2.5含CEN的YCp169 7.2.6穿梭載體170 7.3...
將其中的RM07通過穿梭載體(含有無啟動子的lacZ報導基因)分別轉入大腸桿菌和酵母菌中研究其功能,發現來源於古菌的DNA片段同時在真核細胞和原核細胞中具有啟動子活性。另外還發現嗜鹽古菌的質粒可以在腸桿菌中進行高拷貝複製。這些研究結果不僅對進一步闡明頗具爭議的生物系統發育、進化等問題以及揭示古菌的基因複製、轉錄...
穿梭克隆載體、細菌人工染色體、細菌表達載體、真核表達載體、昆蟲細胞載體、酵母表達載體、體外表達載體、螢光蛋白載體、雙雜交載體、信號轉導載體、siRNA表達載體、熱休克載體、報告基因載體、亞細胞定位載體、轉座子構建載體、噬菌體展示載體、特異性載體、啟動子元件、Adapter/Linker、載體構建試劑及其它相關載體。
Pichia.pastoris酵母菌體內無天然質粒,所以表達載體需與宿主染色體發生同源重組,將外源基因表達框架整合於染色體中以實現外源基因的表達。包括啟動子、外源基因克隆位點、終止序列、篩選標記等。表達載體都是穿梭質粒,先在大腸桿菌複製擴增,然後被導入宿主酵母細胞。為使產物分泌胞外,表達載體還需帶有信號肽序列。甲型...
4.侯鑫,劉俊娥. 大腸桿菌—長雙歧桿菌穿梭載體的構建及抑癌基因PTEN在長雙歧桿菌中的表達[J]. 微生物學報,2006,46(3):347-352;5.侯鑫,劉俊娥,扈廷茂. 抑癌蛋白PTEN的原核表達、抑癌活性研究和抗體製備[J]. 生物工程學報,2006,22(1):58-64;6.侯鑫,劉俊娥,扈廷茂. PJ綜合症相關抑癌基因...
在採用輪換用藥和穿梭用藥方案時,必須根據藥物的作用方式和特點確定這些藥物的使用順序,應避免變換使用作用方式相同的2種藥物。例如,在肉仔雞的最初幾周,先用抑球蟲藥,再用離子載體類藥物是不明智的因為被球蟲藥抑制的內生性發育期,不受後來使用的離子載體類藥物的作用,內生性發育期仍可發育。另外,在一批肉...