構建的shRNA真核表達載體或者mirshRNA真核表達載體，由於載體上均帶有LR同源重組臂，所以這些載體均可作為YRBIO腺病毒包裝系統中的穿梭載體使用。如果目的細胞質粒轉染效率較低，則可直接以這些載體為基礎包裝腺病毒，利用腺病毒感染目的細胞。
基本介紹
- 中文名：shRNA真核表達載體構建
- 別稱：mirshRNA真核表達載體
- 優點：可以選擇構建一條或者多條
- 缺點：載體上沒有螢光標記。
介紹,表達系統匹配,TRC,
介紹
YRBIO-shRNA表達系統
作為RNA干擾實驗的第一步，靶位點的選擇，以及相應的shRNA表達載體構建，是整個RNA干擾實驗的重中之重。靶位點選擇恰當，shRNA干擾效率高，整個RNA干擾實驗就能夠事半功倍，否則，就會做許多無用功。
shRNA表達載體構建後均可作為YRBIO腺病毒包裝系統中的穿梭載體使用。如果目的細胞質粒轉染效率較低，則可直接以這些載體為基礎包裝腺病毒，利用腺病毒感染目的細胞。
有許多免費軟體或網站能夠提供靶位點選擇及shRNA序列設計，但是這種免費軟體算法落後，設計出的shRNA序列有效率只有25%~30%左右。與之相對應的，是一些商業化軟體，或者現成的商業化shRNA庫，由於其算法先進，設計原則合理，其提供的shRNA序列的有效率通常能達到75%以上，亦即可以達到每四條shRNA有三條有效。
基於以上，YRBIO系統在國內率先引進代表RNA干擾領域全球頂尖水準的TRC（The RNAi，RNA干擾協會）開發的TRC shRNA庫。該庫針對人、小鼠、大鼠等數萬個基因，每個基因提供3~5條shRNA（已構建至載體上），總數達五萬多條，且數量還在不斷增加。經過大規模實驗驗證，其中超過75%均為有效shRNA，其干擾效率均大於70%（大多數超過80%）。
以此shRNA庫為基礎，針對每個基因，可提供3~5條高質量的shRNA序列，並且構建到shRNA真核表達載體上。由於此資料庫中的shRNA序列有效性超過75%，亦即理論上來說，每一套shRNA克隆中，必定至少有一條shRNA的干擾效率超過70%。右圖為攜帶綠色螢光的shRNA真核表達載體pYr-1.1-hU6-EGFP質粒圖譜 (attL1和attL2為腺病毒重組位點）。
選擇需要干擾的目的基因，從資料庫中調取相應的shRNA序列信息，然後，選擇合適的shRNA表達系統來表達shRNA。
YRBIO系統提供的shRNA真核表達載體，共有hU6、mU6、hH1、h7SK等四種polIII型啟動子可供選擇，可選擇攜帶螢光（包括綠色螢光、紅色螢光）或不攜帶螢光。除此之外，還提供mirshRNA真核表達載體，可以進行mirshRNA真核表達載體構建。
利用腺病毒的高感染效率、高表達效率，更好地進行RNA干擾研究實驗！
既可以用來當普通的shRNA真核表達載體用，同時又是穿梭載體，可以拿來包裝腺病毒，而且其干擾有效性、干擾效率大部分都超過 80%！
選用YRBIO-shRNA表達系統，具有如下優點：
（1）shRNA序列數據依然來自國外成熟shRNA資料庫，質量有保證。RNA干擾效率的高低主要取決於靶位點的選擇、shRNA序列的設計，而由於YRBIO所採用的shRNA序列來自國外成熟shRNA資料庫，算法先進，靶位點成功率高，所以shRNA的干擾成功率非常高。
（2）您可以選擇構建一條或者多條，靈活度高。
（3）多種啟動子，有螢光或無螢光，綠色螢光或紅色螢光等可自由選擇，以更好地配合後續實驗。
（4）載體可作為普通shRNA表達載體使用，亦可作為腺病毒包裝系統的穿梭載體使用，以進行腺病毒包裝。
右圖為不攜帶螢光的shRNA真核表達載體pYr-2.1-hU6質粒圖譜(attL1和attL2為腺病毒重組位點)。
表達系統匹配
此shRNA資料庫亦有一套原裝進口的shRNA表達系統相匹配，針對每個基因的一套shRNA序列均已構建至相應的shRNA表達載體上，可直接使用,整套產品均為原裝進口。
此系統中，裝載shRNA序列的真核表達載體，同時也是YRBIO第三代慢病毒包裝系統中的穿梭載體。也就是說，如果目的細胞質粒轉染效率較低，那么只需相應的慢病毒包裝系統中的包裝質粒、轉染試劑、293T包裝細胞，便可以將這些shRNA包裝慢病毒，利用慢病毒的高感染效率、高表達效率、長期表達特性，更好地進行RNA干擾研究實驗！
右圖為shRNA真核表達載體pYrbio-LT-1質粒圖譜
選用原裝進口shRNA表達系統，具有：
優點：
（1）原裝進口產品，未做任何改動。
（2）裝載shRNA序列的真核表達載體，同時也是慢病毒包裝系統中的穿梭載體，可用以包裝慢病毒。
缺點：
（1）載體上沒有螢光標記。
（2）載體骨架稍微有點大，有7K左右。
TRC
TRC（The RNAi，RNA干擾聯盟）是由麻省理工學院和Harvard牽頭建立的合作機構，包括Massachusetts General Hospital、Harvard Med school、Dana Farber Cancer Inst、The Broad Institute、Whitehead Institute、MIT、Academica Sinica (Taiwan)和另外5個國際性組織，代表著RNA干擾領域的全球最頂尖水平。該組織計畫在3年內構建數量達15,000個人類基因和15,000個小鼠基因的shRNA文庫。第1版的TRC shRNA文庫包括35,000 shRNA克隆（其中人類基因有5300個，小鼠基因有2200個），其它新構建的克隆每個季度會陸續公布。
