雙啟動子表達載體

基因工程表達載體

在基因工程技術當中，克隆載體主要用來目的基因的數量擴增。當需要獲得目的基因的表達產物時，則需要使用基因表達載體。在生物體內，完整的基因包括啟動子區域、編碼區域、終止區域，因此表達載體將外源基因在宿主細胞中表達成蛋白質，其必要條件是：①需要很強的啟動子，並能被宿主細胞的RNA聚合酶識別並啟動轉錄，這樣保證基因大量表達；②需要很強的終止子，使得RNA聚合酶轉錄目的基因的序列而不是其他無關的序列；③目的基因的編碼區必須具有翻譯起始密碼子ATG，原核表達載體還需要SD序列(圖1)。

根據重組表達載體產生的蛋白存在形式，將表達載體分為融合型載體和非融合型載體。就一般情況而言，實驗者是希望得到非融合蛋白。但是融合蛋白質有其優勢，一方面，載體上的融合標籤序列使得蛋白純化變得容易，另一方面，融合序列可使蛋白的翻譯效率提高，基因產物較為穩定。最後，融合蛋白可通過化學方法裂解成非融合蛋白。

基因表達載體有很多類型，如誘導型表達載體、反義基因表達載體、組織特異性表達載體、分泌型表達載體、雙啟動子表達載體等。

表達載體應該具備的條件

①能自我複製並能帶動插入的外源基因同步複製。

②具有合適的限制性內切酶位點。在載體上單一的限制性內切酶位點越多越好，這樣可以將不同限制性內切酶切割後的外源DNA片段方便地插入載體。

③具有合適的篩選標記，方便選擇克隆子，如抗藥性基因等。

④在細胞內拷貝數要多，這樣才能使外源基因得以擴增。

⑤載體的分子質量要小。這樣可以容納較大的外源DNA插入片段。載體分子質量太大將影響重組體或載體本身的轉化效率。

⑥在細胞內穩定性高，這樣可以保證重組體穩定傳代而不易丟失。

⑦基因載體必須是安全的，不應含有對受體細胞有害的基因，而且不會轉入除受體細胞以外的其他生物的細胞，尤其是人的細胞。