空間排阻色譜法

空間排阻色譜法是按分子大小順序進行分離色譜的方法。

基本介紹

• 中文名：空間排阻色譜法
• 外文名：size exclusion chromatography，SEC
• 套用：大分子分級

簡介

空間排阻色譜法又名尺寸排阻色譜法(size exclusion chromatography，SEC)，是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法。

被廣泛套用於大分子分級，即用來分析大分子物質相對分子質量的分布。

其固定相為化學惰性多孔物質——凝膠，凝膠具有一定大小的孔穴，體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻，較早的淋洗出來；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內，最後洗出色譜柱。這樣，樣品分子基本按其分子大小先後排阻，從柱中流出。

詳解

空間排阻色譜法以凝膠(gel)為固定相。它類似於分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。溶質在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離，而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質的流動力學體積或分子大小有關。試樣進入色譜柱後，隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻，因此就直接通過柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進入所有膠孔並滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值最大，在色譜圖上最後出現。高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點。