流式螢光技術

流式螢光，又稱懸浮陣列、液相晶片等，是近20多年逐漸發展起來的多指標聯合診斷技術。該技術以螢光編碼微球為核心，集流式原理、雷射分析、高速數位訊號處理等多種技術於一體，多指標並行分析，最多可一管同時準確定量檢測2-500種不同的生物分子；具有高通量、高靈敏度、並行檢測等特點；可用於免疫分析、核酸研究、酶學分析、受體、配體識別分析等多方面、多領域的研究。

基本介紹

• 中文名：流式螢光技術
• 又稱：懸浮陣列、液相晶片、懸液晶片等
• 性質：診斷技術平台
• 特點：高靈敏度，並行檢測等

技術原理

將螢光標記後的單細胞（或顆粒）懸液進入吸樣管，進而隨鞘液進入流動室。進入流動室之前的管道變細，迫使鞘液從四周、樣本在中心進入流動室，在外加壓力的作用下由下向上（或由上向下）直線流動。鞘液充滿流動室將樣品裹挾，當二者通過流動室噴嘴流出時，壓力迫使鞘液包裹的液滴包含單一細胞或顆粒垂直通過檢測區。在檢測區與液滴垂直的位置設定雷射，在與雷射垂直的位置設定探測器（透鏡等），液流、雷射、探測器互相垂直並聚焦於一點實現流體動力聚焦。螢光標記的細胞或顆粒在雷射激發下發出散射光和螢光的發射波，散射光和發射光被檢測器獲取，再經一系列濾光片、光柵處理去除干擾並將光信號經光電轉換和放大後輸入計算機，並由軟體分析處理。而細胞分選則是對螢光標記的目的分子分別載入正或負電荷，當其在隨液滴滴落的過程中受到外加高壓電場的作用發生偏轉而落入接收容器，從而獲得目的細胞群。

技術特點

1、高通量：將許多種不同螢光編碼的微球放在同一反應體系內，一次可同時檢測2-500種生理病理指標，這與傳統方法的逐個檢測相比是質的飛躍。

流式螢光技術

2、高敏感性：流式螢光技術最高的檢測下限可達0.01 pg/ml，常規的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)僅為μg級，比後者檢測的靈敏度提高10—100倍。

3、線性範圍寬：檢測的線性範圍比常規的ELISA方法高10倍以上，可達3-5個數量級。檢測濃度範圍為pg-μg級。

4、反應快速：因流式螢光技術的雜交或免疫反應在懸浮的液相中進行，反應所需的時間短(從2 h縮短到20—40 min)，雜交後常不用清洗，即可直接讀數，所以檢測效率高於固相雜交。

5、重複性好：雜交發生在準均相液體環境中，其結果穩定，重複性非常好。檢測時，抽取其中的100顆微球讀數，最終的數據取其均值或中位值，這樣可將誤差減到最小。

6、利於探針和被檢測物的充分反應：由於液相環境更有利於保持蛋白質的天然構象，所以也更有利於探針和被檢測物的反應。

7、操作簡便：流式螢光技術平台的整個反應過程只涉及加樣和孵育，最後上機讀數，操作步驟少，簡單易用。

現狀

流式螢光平台一經推出，便在醫學診斷與基礎研究的各個領域得到了迅速推廣，截止2014年底，已有20000台以上流式螢光平台在全球各大權威實驗室、臨床診斷科、主要的診斷試劑和生物技術公司、製藥企業中投入使用。

套用領域涉及HLA配型、自身免疫病檢測、過敏原檢測、基因突變檢測、腫瘤標誌物檢測、HPV分型等眾多免疫、分子檢測。

美國Luminex 200作為代表機型，已於2009年獲得中國食品藥品監督局CFDA的進口醫療器械註冊證書。

除HPV DNA分型產品，流式螢光技術在核酸、蛋白領域套用非常廣泛，透景科技可提供多種科研試劑及科研服務，現有科研試劑主要有EGFR、KRAS、BRAF基因突變、多重呼吸道病毒、多種細胞因子及趨化因子、糖尿病/肥胖相關激素等檢測產品。

套用

白血病是嚴重威脅人類健康的惡性疾病，既往的細胞形態學分型診斷符合率及正確率受檢測者主觀成分影響較大，近兩年白血病分子特徵的研究取得了明顯進展，尤其是對染色體易位形成的融合基因，有一些已作為診斷不同類型白血病的分子生物學特異性標誌和確定診斷的唯一依據。

基於此，在流式螢光技術基礎上推出的白血病融合基因檢測項目，可以一次檢測12種常見融合基因，覆蓋50%以上初發病例，並且靈敏度高、特異性好，省時、省力、省標本。

白血病

檢測結果不僅可以為白血病診斷、分型、臨床治療和預後判斷提供重要依據，同時也是白血病微小殘留病的檢測基礎。

檢測意義

1.融合基因檢測對白血病診斷的意義

評價白血病的急性程度、克隆特性及分型，使白血病的診斷分型更加科學化和規範化；可檢出1×106個有核細胞中的一個白血病細胞，在白血病的早期診斷方面有著其它方法無可比擬的特異性和敏感性。

2.融合基因檢測對白血病治療和預後判斷的意義

細胞遺傳學分型與疾病的預後關係密切，對於指導臨床個性化治療方案的選擇和判斷預後具有十分重要的意義；有了融合基因的檢測，初治時可指導科學合理選擇長期治療方案，避免不必要的治療不足或過度治療。

3.融合基因檢測對白血病微小殘留病變監測的意義

白血病患者體內融合基因轉錄本的拷貝數隨病情進展逐漸升高；隨病情好轉逐漸下降，並且早於細胞遺傳學的染色體核型分析。因此融合基因檢測可以早期準確地診斷微小殘留病，防治白血病復發，也是指導臨床治療、評價治療效果和預測復發的實驗室指標。