液氮保藏法

液氮保藏法，亦稱超低溫保藏法。主要利用微生物在低於-130°C的低溫下新陳代謝趨於停止的原理，在液氮中（-196°C的超低溫下）有效地進行菌種保藏的方法。此法操作簡便、高效，保藏期一般可達到15年以上，是目前公認的菌種長期保藏技術之一，並且適用於各類微生物菌種的保藏。但是，採用液氮保藏，需購置超低溫液氮設備，且液氮消耗量大，費用高。液氮低溫保藏的保護劑，一般選擇甘油、二甲基亞碸、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊環、吐溫80等，最常用的是甘油（10%〜20%），不同微生物應選擇不同的保護劑，保護劑的濃度應控制在不造成微生物死亡為宜。

基本介紹

• 中文名：液氮保藏法
• 外文名：cryo-preservation by liquid nitrogen
• 別稱：液氮超低溫保藏法
• 類型：菌種保藏方法

操作方法

把微生物細胞混懸於含保護劑（20%甘油，10%DMSO等）的液體培養基中（也可把含菌瓊脂塊直接浸入含保護劑的培養液中），分裝入耐低溫的安瓿瓶中後，作緩慢預冷，然後移至液氮罐中的液相（-196℃）或氣相（-156℃）作長期超低溫保藏。

操作原則

“慢凍快溶”。

原理

利用微生物在-130℃以下新陳代謝趨於停止而有效地保藏微生物。

0.5mol/L左右的甘油或二甲亞碸（dimethyl sulfoxide，DMSO）可透入細胞，並通過降低強烈的脫水作用而保護細胞。

優缺點

優點

保藏期長（15年以上），且適合保藏各類微生物，尤其適宜於保存難以用冷凍乾燥保藏法保藏的微生物，如支原體、衣原體、不產孢子的真菌、微藻和原生動物等。

缺點

需要液氮罐等特殊設備，且管理費用高、操作較複雜、發放不便等。