液體培養基

液體培養基（ liquid culture medium），固體培養基的對應詞，是微生物或動植物細胞的液狀培養基。它具有進行通氣培養、振盪培養的優點。在靜止的條件下，在菌體或培養細胞的周圍，形成透過養分的壁障，養分的攝入受到阻礙。由於在通氣或在振盪的條件下，可消除這種阻礙以及增加供氧量，所以有利於細胞生長，提高生產量。

基本介紹

• 中文名：液體培養基
• 外文名：liquid culture medium
• 屬別：培養基
• 儲存條件：3~6℃，防潮、避光、陰涼
• 優點：通氣培養、振盪培養
• 包含元素：碳水化合物、含氮物質、無機鹽等

簡介

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素，用於單種微生物培養和鑑定。

液體培養基是培養基物理分類一種，是相對固體培養基而言的，是微生物或動植物細胞的液狀培養基。在液體培養基中的培養稱為液中培養、液體培養或液內培養。

培養基由於配製的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮後，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基（如組織培養基），較長時間的貯存，必須放在3~6℃的冰櫃內。

培養基的配製

1.配料

配方換算→在容器中加入少量水〔蒸餾水，自然水〕→按照配方稱取各種藥品〔依次加入〕→加足所需水量《一藥一勺，取藥後立即蓋上瓶蓋》。

2.溶解

澱粉溶解：少量冷水調成糊狀

加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95～97℃ ，且需要邊

加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調PH

用1N的鹽酸或的1N NaOH把培養基調節到所要求的值。

4.過濾

濾紙或棉花進行過濾。

5.分裝

一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

(1)三角瓶

若作靜置培養，則100 ml培養基/250 ml的三角瓶，最多不能超過150 ml培養基/250 ml的

三角瓶，否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養，則15～20 ml培養基/250

ml的三角瓶，保證通氣良好。

(2)試管分裝

液體培養基一般裝4～5 ml，約試管的1/4高度；

固體斜面培養基一般裝3～4 ml，約試管的1/5高度。

6.包紮

分裝好後，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。

7.滅菌

按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養成分會被破壞，培養

基中的糖、胺基酸會使培養基的顏色變深。

8.擺斜面

滅菌後需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

9.貯存

培養基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放於2-8℃冰櫃中備用

配製培養基的原則

根據培養目的需要選擇適宜的營養物質

由於微生物營養類型複雜，不同微生物有不同的營養要求。因此，要根據不同微生物的營養需求選擇適宜的營養物質，配製針對性強的培養基。

自養微生物有較強的合成能力，能以簡單的無機物如co2和無機鹽合成複雜的細胞物質。因此，培養自養微生物的培養基應由簡單的無機物組成。

異養微生物的合成能力較弱，不能以CO2作為唯一碳源或主要碳源，故應在培養基中至少添加一種有機物。

注意營養物質的濃度與配比要合適

微生物只有在營養物質濃度及其比例合適時才能良好生長。營養物質濃度過低不能滿足現生長需要，過高又抑制其生長。例如，適量的蔗糖是異養微生物的良好碳源和能源，但高濃度蔗糖則抑制菌體生長。金屬離子是微生物生長所不可缺少的礦質養分，但濃度擴大，尤其是重金屬離子，反而抑制其生長，甚至產生殺菌作用。

控制培養基的條件

(1) 控制培養基的pH 配製培養基必須根據微生物的特點調節pH。各大類微生物要求的適宜生長pH範圍不同。如黴菌與酵母菌一般為5.0-6.0, 細菌為6.5-7.5.放線菌為7.5-8.5.培養基的pH與其C/N有極大關係。C/N高的培養基，例如培養各種真菌的培養基，經培養後其pH明顯下降;相反，C/N低的培養基，例如培養一般細菌的培養基， 經培養後，其pH則明顯上升。這是由於營養物質的消耗與代謝產物的積累，改變了培養基的pH，若不及時控制，將導致菌體生長停止。

(2)調節氧化還原電位(Eh) 各種微生物對培養基的Eh要求不同。適宜好氧微生物生長的Eh值一般為+0.3~+0.4V，厭氧微生物只能在+0.1V以下生長，因此，培養好氧微生物必須保證氧的供應，可在培養基中加入氧化劑提高Eh值。

(3)調節滲透壓 多數微生物能耐受較大範圍滲透壓的變化。培養基中營養物質的濃度過大，會使滲透壓過高，使細胞發生質壁分離而抑制微生物生長。低滲溶液則使細胞吸水膨脹易破裂，因此，配製培養基時要掌握營養物質的濃度。常在培養基中加人適量的Nacl以提高滲透壓。

原料來源的選擇力求節約

配製培養基還應遵循力求節約的原則，儘量選用價格便宜、來源方便的原料。特別是在工業發酵中，培養基用量大，更應注意利用低成本的原料，降低產品成本。

滅菌處理

為了避免雜菌污染，獲得微生物純培養物，培養基必須及時嚴格滅菌。通常採用高壓蒸汽滅菌。一般培養基用0. IMPa (121℃)維持15 ~ 30min即可徹底滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質破壞，如使糖類物質形成氨基糖、焦糖。因此，含糖培養基常用0.05MPa (110℃) 滅菌20 ~ 30min某些對糖類要求更高的培養基，可先將糖過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產生沉澱。為了防止這類沉澱發生，可將這些物質分別滅菌，冷卻後再混合；也可在培養基中加入少量整合劑(0.01%乙二胺四乙酸，即EDTA)使金屬離子形成可溶性絡合物，防止沉澱的產生。高壓蒸汽滅菌一般使培養基 pH降低， 應在配製培養基時加以調節。

幾種液體培養基配方

牛肉膏蛋白腖液體培養基

(又稱營養肉湯,用於培養細菌)
成分:牛肉膏3g、蛋白腖10g、NaCl5g,蒸餾水(或去離子水)1000mL,pH7.4士0.2.
製法:將各成分溶解於水中，於20~25℃條件下以1mol/LNaOH溶液用pH計校正pH7.4,分裝三角瓶(裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜)，或試管(分裝量以試管高度的1/4左右為宜),0.1MPa滅菌15~20min後備用。

LB液體培養基

(用於培養細菌,常在分子生物學中套用)
成分:胰蛋白陳10g、酵母膏5g.NaCl10g、瓊脂15~20g,雙蒸餾水1000mL，pH7.0

製法:將各成分溶於1000mL雙蒸餾水中，用1mol/LNaOH(約1mL)調節pH,分裝後，0.IMPa滅菌15-20min。必要時也可在培養基中加入0.1%葡萄糖。半固體培養基加入0.4%-0,5%瓊脂。

豆芽汁液體培養基

(用於培養酵母菌和黴菌及黴菌原生質體融合)
成分:豆芽汁1000mL、磷酸氫二銨1g.KCl 0.2g、 MgSO4 .7H2O,0.2g.pH6.2-6.4.

製法:將固體成分於豆芽汁中加熱溶解，校正pH,如果配製固體培養基再加人15-20g瓊脂,分裝三角瓶或試管,0.07MPa滅菌20min
豆芽汁製備:將黃豆或綠豆用水浸泡一夜，置於室溫(20℃左右)下，上覆蓋濕布,每天沖洗1~2次，棄去腐爛不發芽者，待發芽至1寸左右即可。將黃豆芽或綠豆芽200g洗淨，在1000mL水中煮沸30min，紗布過濾得豆芽汁,補足水分至1000mL,此即為20%的豆芽汁。

化學分類

天然培養基

指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物製成的培養基。如牛肉膏蛋白腖培養基、麥芽汁培養基等。

組合培養基

又稱為合成培養基或綜合培養基，是一類按微生物的營養要求精確設計後用多種高純化學試劑配製成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、澱粉硝酸鹽培養基等。

半組合培養基

指一類主要以化學試劑配製，同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如，馬鈴薯蔗糖培養基。