《晚期致炎因子HMGB1在酒精性肝病中的作用及機制》是依託西安交通大學，由郝志明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：晚期致炎因子HMGB1在酒精性肝病中的作用及機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：郝志明
- 依託單位：西安交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
酒精性肝病（ALD）發生的中心環節是酒精及其代謝產物和腸源性LPS激活肝臟固有性免疫系統，致炎症因子的過量產生。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是固有免疫應答過程中的關鍵觸發因子和重要的晚期炎症因子。在前期研究發現ALD患者血清內HMGB1水平及ALD大鼠肝臟HMGB1表達明顯上調的基礎上，本課題擬觀察以AAV介導HMGB1 boxA腸道表達拮抗HMGB1及主動免疫方式中和HMGB1對大鼠實驗性ALD的抑制作用，證實HMGB1在ALD炎症發生過程中的作用；通過精密肝切片培養，從亞器官水平觀察酒精和LPS誘導肝組織釋放HMGB1的作用及HMGB1對炎症因子釋放的促進作用；通過培養肝細胞、肝星狀細胞和巨噬細胞，進一步從細胞水平確定ALD過程中HMGB1的來源及HMGB1在ALD中發揮作用的靶細胞，旨在驗證HMGB1在ALD發生過程介導炎症的作用及初步闡明其作用機理，為ALD防治提供新的靶分子。
結題摘要
（1）以及因工程技術表達和純化了HMGB1、HMGB1 A box、HMGB1 B box重組蛋白。（2）製備了針對多個HMGB1表位的小鼠多克隆抗體，可用於免疫組化、免疫螢光、Wstern blot及雙抗體夾心ELISA法檢測HMGB1的表達。（3）製備了4個基於B型肝炎核心蛋白為載體，攜帶HMGB1表位的重組蛋白（HBcΔ-HMGB1-53-63、HBcΔ-HMGB1-67-78、HBcΔ-HMGB1-95-112、HBcΔ-HMGB1-150-183），證實了其免疫原性，作為候選HMGB1疫苗。（4）製備了能分泌表達HMGB1 A box的重組腺相關病毒(AAV-HMGB1 A box)。（5）以AAV-HMGB1 A box + C tail介導HMGB1 A box+C tail拮抗胞外型HMGB1可減輕小鼠ALD肝臟損害，降低轉氨酶，減輕肝細胞壞死，改善脂肪變，降低血清甘油三酯。提示HMGB1在酒精性肝病發生髮展中起著重要作用，AAV介導HMGB1 A Box+C tail分泌表達有望成為治療ALD的新方法。（6）觀察了HMGB1疫苗對CCl4誘導的實驗性肝纖維化的抑制作用。發現以HBcΔ-HMGB1-95-112免疫對CCl4誘導的小鼠肝纖維化有顯著的抑制作用，提示HMGB1參與了肝纖維化的發生髮展，而且提示其有進一步研究價值和開發潛力。（7）證實經AAV介導的HMGB1 A Box分泌表達能夠減少CCl4誘導的纖維化過程中肝細胞死亡、減輕肝細胞損傷，減輕肝纖維化程度。AAV介導HMGB1 A Box分泌表達有望成為一種簡單、安全、有效的肝纖維化治療新方法。（8）發現AAV-HMGB1 A box能顯著抑制DSS和TNBS誘導的小鼠結腸黏膜損傷，抑制腸黏膜炎症細胞侵潤，調節黏膜炎症因子水平，顯著減輕腸黏膜細胞凋亡和黏膜上皮細胞增生。提示胞外HMGB1在炎症性腸病的發生、進展過程中起著關鍵作用，AAV-HMGB1 A box介導HMGB1 A box分泌表達拮抗HMGB1有可能成為炎症性腸病的治療手段之一。（9）觀察了HMGB1疫苗及AAV-HMGB1 A box對博萊黴素誘導的實驗性肺纖維化的抑制作用。初步結果不支持HMGB1在BLM肺纖維化中的致病作用。（10）正在採用SELEX技術篩選針對HMGB1 B box的核酸適配子。
