基本介紹
- 中文名：大腸桿菌TOP10菌株
- 外文名：Escherichia coli TOP10 strain
- 適用：高效的DNA克隆和質粒擴增
- 優點：高拷貝質粒能穩定遺傳
- 屬於：大腸桿菌表達菌株
- 感受態細胞：可用於DNA 的化學轉化
大腸桿菌表達菌株,DH5a菌株,BL21(DE3) 菌株,BL21(DE3) pLysS菌株,JM109菌株,TOP10菌株,HB101菌株,M110或 SCS110,E.coli JM110,大腸桿菌表達菌株製備的感受態細胞,Xl1-Blue菌株,BL21(DE3)菌株,BL21(DE3)ply菌株,DH5α菌株,JM109菌株,TOP10 菌株,
大腸桿菌表達菌株
DH5a菌株
DH5a是一種常用於質粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列質粒載體轉化時，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實現α－互補。可用於藍白斑篩選鑑別重組菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1。
BL21(DE3) 菌株
該菌株用於高效表達克隆於含有噬菌體T7啟動子的表達載體（如pET系列）的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位於λ 噬菌體DE3區，該區整合於BL21的染色體上。該菌適合表達非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）。
基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）。
BL21(DE3) pLysS菌株
該菌株含有質粒pLysS，因此具有氯黴素抗性。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr。
JM109菌株
該菌株在使用pUC系列質粒載體進行DNA轉化或用M13 phage載體進行轉染時，由於載體DNA產生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α－互補，從而顯示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鑑別重組體菌株
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]。
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]。
TOP10菌株
該菌株適用於高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩定遺傳。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG。
HB101菌株
M110或 SCS110
大多數大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，後者在CCA/TGC序列的第一個胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都會產生dam,dcm，從而受到甲基化的影響.
部分限制性內切酶對甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的內切酶說明中均有說明。
大多數酶切位點的甲基化不影響切割，而有些會影響，如XbaI, BclI等。而且甲基化只發生在特定序列，以XbaI為例，只有在位點序列旁出現GA或TC，該XbaI位才會被甲基化。
而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：
（1）選用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA識別切割位點與MboI相同；但不受甲基化影響；
（2）利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的製備，如E.coli JM110和鏈黴菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而後者細胞內本就沒有甲基化酶，從這些細胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。
部分限制性內切酶對甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的內切酶說明中均有說明。
大多數酶切位點的甲基化不影響切割，而有些會影響，如XbaI, BclI等。而且甲基化只發生在特定序列，以XbaI為例，只有在位點序列旁出現GA或TC，該XbaI位才會被甲基化。
而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：
（1）選用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA識別切割位點與MboI相同；但不受甲基化影響；
（2）利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的製備，如E.coli JM110和鏈黴菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而後者細胞內本就沒有甲基化酶，從這些細胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。
E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影響，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110
如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產生的質粒，則不會被甲基化。
如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產生的質粒，則不會被甲基化。
大腸桿菌表達菌株製備的感受態細胞
Xl1-Blue菌株
基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。
特點：具有卡那抗性、四環素抗性和氯黴素抗性。
用途：分子克隆和質粒提取。
特點：具有卡那抗性、四環素抗性和氯黴素抗性。
用途：分子克隆和質粒提取。
BL21(DE3)菌株
基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。
特點：該菌株用於以T7 RNA聚合酶為表達系統的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受控於λ噬菌體DE3區的lacUV5啟動子，該區整合於BL21的染色體上。該菌適合於非毒性蛋白的表達。
用途：蛋白質表達。
特點：該菌株用於以T7 RNA聚合酶為表達系統的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受控於λ噬菌體DE3區的lacUV5啟動子，該區整合於BL21的染色體上。該菌適合於非毒性蛋白的表達。
用途：蛋白質表達。
BL21(DE3)ply菌株
基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。
特點：該菌株帶有pLysS，具有氯黴素抗性。此質粒還有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基
因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。 適合於毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。
用途：蛋白質表達
特點：該菌株帶有pLysS，具有氯黴素抗性。此質粒還有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基
因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導的表達。 適合於毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。
用途：蛋白質表達
DH5α菌株
JM109菌株
基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。
特點：部分抗性缺陷，適合重複基因表達, 可用於M13克隆序列測定和藍白斑篩選。
用途：分子克隆、質粒提取和蛋白質表達。
特點：部分抗性缺陷，適合重複基因表達, 可用於M13克隆序列測定和藍白斑篩選。
用途：分子克隆、質粒提取和蛋白質表達。
TOP10 菌株
TOP10 菌株感受態細胞是採用大腸桿菌TOP10 菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用於DNA 的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達10的8次方個轉化子/μg質粒DNA，-70℃保存3個月轉化效率可保持在90%以上。
