基本介紹
- 中文名：基因型群
- 外文名：genospecies
材料與方法
一、研究對象
病例來源於2003年8月～2004年11月河北醫科大學第二醫院門診和石家莊市傳染病醫院門診就診的CHC患者64例。其中男40例，女24例，年齡19～69歲，平均47.0±13.1歲。
納入標準：（1）符合2000年中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂的《病毒性肝炎防治方案》CHC診斷標準；（2）血清HCV-RNA定量檢測高於正常值高限；（3）年齡18～70歲；（4）血清總膽紅素<34.2μmol/L，ALT35g/L，而血清尿素氮和肌酐、凝血酶原時間、部分凝血酶原時間、凝血酶原活動度均在正常值範圍內，外周血紅蛋白>120g/L（女性大於110g/L），白細胞大於3.5×10E9/L，中性白細胞大於1.5×10E9/L，血小板大於80×10E9/L。
排除標準：符合以下任何一項標準，將剔除出本項研究（1）肝硬化、肝臟實質性占位以及藥物性肝病者；（2）合併嚴重的心、腎、腦血管疾患。且病情不穩定或活動者；（3）HAV、HBV、HDV、HIV陽性，有自身免疫性肝炎徵象者（抗核抗體滴度大於1∶20）；（4）篩選前6個月接受過免疫球蛋白、干擾素或其他免疫製劑、細胞毒素等影響HCV活動度的藥物；（5）妊娠期和哺乳期的婦女或育齡婦女用藥前尿妊娠研究陽性者；（6）器官或骨髓移植者。
對照選擇：健康對照組共8例，其中男5例，女3例，年齡20～67歲，平均（48.0±12.0）歲。與實驗組具有可比性。
二、方法
（1）HCV-RNA及基因分型檢測套用螢光PCR定量法檢測HCV-RNA，採用基因晶片技術檢測HCV基因型。HCV-RNA定量檢測試劑購自中山大學達安基因股份有限公司，基因晶片由天津荊申生物製劑公司設計合成。
（2）血清IL-4和干擾素-γ檢測檢測所有入選病例及健康對照者血清IL-4和干擾素-γ水平。採用雙抗體夾心酶聯分析法同批測定全部血清標本。血清IL-4和干擾素-γ水平以pg/L表示。血清IL-4和干擾素-γ檢測試劑盒購自美國TPI公司。
三、統計學處理
計數資料採用χ2檢驗，計量資料採用t檢驗、相關分析，檢驗水準a=0.05。所有數據經SPSS10.0統計軟體處理。
結果
一、基因型檢測
64例患者中，因1例未能成功分型，實際納入分析63例檢測結果：（1）1b型者49例（77.8%），其中男31例，女18例；年齡19～69歲，平均（45.8±12.5）歲。（2）2a型者14例（22.2%），男9例，女5例；年齡24～59歲，平均（44.5±11.1）歲。1b型與2a型兩組性別、年齡無顯著性差異。
二、血清IL-4與干擾素-γ檢測
實驗組63例的血清IL-4和干擾素-γ檢測結果與對照組相比均有顯著差異。
三、不同基因型間病毒載量、血清干擾素-γ、IL-4和ALT比較
顯示HCV1b型病毒載量高於2a型，具有顯著性差異，1b和2a型血清干擾素-γ水平也有顯著性差異。HCV1b和2a兩型間血清IL-4水平相近，無統計學意義。1b和2a型的ALT水平無統計學差異。
討論
HCV為黃病毒科單股正鏈線狀RNA，基因組特點表現為高度多態性和異質性。
HCV基因是根據核苷酸序列的差異進行分型。按照Simmonds分型標準，如HCV基因序列同源性小於72%由分屬不同的基因型，同源性在75%～86%之間則為不同亞型。本實驗採用具有高通量，自動化程度高，系統化等特點的基因晶片作為基因型的檢測手段。結果表明，有1例HCV-RNA用PCR檢測陽性，用基因晶片檢測通用探針陽性，但分型探針陰性，可能因HCV病毒發生變異或為目前技術尚不能檢測的其他基因型。餘63例檢測出的基因型，1b型49例，2a型14例，說明石家莊地區基因型主要以1b、2a型為主，與其他有關基因型地域分布的報導基本上一致。
有報導不同基因型及亞型的致病性並不一致。重型肝炎、失代償性肝硬變、原發性肝癌和肝移植術後復發的患者HCV1b型較為多見。有學者認為，1b型對干擾素的治療應答顯著低於2a及2b型。目前HCV基因型已作為判斷干擾素抗病毒治療療效、療程及病情預後的一個重要影響因素。Th1細胞在急性自限性HCV感染和慢性HCV感染的炎症活動期占優勢，IL-2、干擾素-γ等分泌較多，慢性HCV攜帶狀態及炎症靜止期以Th2細胞反應為主，IL-4、IL-10等分泌較多。Th1細胞免疫應答低下者，患者常表現呈HCV長期持續感染狀態。本研究表明，實驗組IL-4和干擾素-γ均與正常對照組有顯著差別，作為Th2細胞因子的IL-4升高，而提示Th1的細胞因子干擾素-γ降低，提示實驗組病例處於HCV慢性感染狀態。
