嗜熱脂肪芽孢桿菌試劑盒法

我國第一家擁有自主智慧財產權的抗生素檢測試劑盒是由北京科拓恆通生物技術開發有限公司開發的。該試劑盒利用嗜熱脂肪芽孢桿菌變種對多種抗生素具有高度敏感性的特點，經過對其芽孢的處理，使其在最適宜條件下激活萌發生長，短時間內分解糖類產生有機酸，導致基質pH下降，結果反應基質中的指示劑由紫色變為黃色。

基本介紹

• 中文名：嗜熱脂肪芽孢桿菌試劑盒法
• 外文名：The method of bacillus thermophilic bacillus
• 菌種：嗜熱脂肪芽孢桿菌變種
• 處理菌株：對其芽孢處理
• 套用：乳製品抗生素檢驗
• 反應類型：變色反應

嗜熱脂肪芽孢桿菌

嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillus stearothermophilus）屬嗜熱性需氧芽孢桿菌，但兼有厭氧的特性，細菌繁殖體革蘭氏染色陽性呈紫色，細菌芽胞孔雀綠著色。嗜熱脂肪芽孢桿菌比較容易識別且對人體沒有危害性，一般作為空間消毒的指示生物。

其細菌繁殖體對培養基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖瓊脂上生長良好，表面粗糙呈米黃色。其最低生長溫度為28℃，最高生長溫度70～77℃。最適生長繁殖溫度為56～65℃，培養24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。

在pH 6.8～7.2的培養基中生長良好，當pH值接近5時就不能生長。因此，這種菌只能在pH5以上的罐頭食品中生長。它在pH≥5的食品中生長，使食品中糖類分解而產酸（乳酸、甲酸、醋酸），不產氣（有時在含氮物質的罐頭食品中微量產氣），使湯汁呈現渾濁並有酸味和異味，是引起低酸性罐頭食品的典型平酸菌之一，通常在青豌豆、青刀豆、蘆筍、蘑菇、紅燒肉、豬肝醬等罐頭中生長而引起腐敗。由於罐頭外觀還是正常、罐底和蓋仍是平的，但內容物已變酸，故稱平蓋酸敗。其耐熱性D值D121.1=4.0～5.0min（指在121.1℃下減少菌數90%所需要的時間）高於嗜溫菌。

嗜熱芽孢桿菌存在抗藥性質粒；嗜熱脂肪芽孢桿菌（60℃）含有多種抗藥性隱蔽質粒。因此人們認為，它們的嗜熱性可能與菌體記憶體在著某種染色體外遺傳因子有關，但還有待進一步地研究和證實。另外，這些嗜高溫特性是否與該菌產生熱穩定性酶和胞膜的特殊性質有一定相關性，這種酶是什麼樣的酶，這種膜具有什麼樣的特殊構造等問題均需要作深入的研究。內因的代表是各種酶蛋白。酶以及許多蛋白質的耐熱性是由其本身的結構特性所決定，熱穩定性起因於微妙的結構差異，這種差異一般隱藏在種間或屬間的胺基酸排列順序上的差異之中。嗜熱細菌的酶幾乎全是熱穩定性的。

嗜熱脂肪芽孢桿菌試劑盒法介紹

北京科拓恆通(SciTop)生物技術開發有限公司開發的抗生素殘留物檢測試劑盒是我國第一家擁有自主智慧財產權的抗生素檢測試劑盒(SciTop試劑盒)，由嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus stearothermophilus Var. calidolactis)芽孢製備而成。該試劑盒利用嗜熱脂肪芽孢桿菌變種calidolactis對多種抗生素具有高度敏感性的特點，經過對其芽孢的處理，使其在最適宜條件下激活萌發生長，短時間內分解糖類產生有機酸，導致基質pH下降，結果反應基質中的指示劑由紫色變為黃色。如果被檢牛乳樣品中含有抗生素殘留物，這些物質擴散到基質中，抑制了芽孢的萌發和繼續繁殖，阻斷糖類的轉化形成有機酸，反應管基質中指示劑的紫色不發生變化。該方法具有廣譜、靈敏度高、成本低等特點。

SciTop試劑盒對各種抗生素的敏感性實驗結果如圖1所示。

圖1

從圖2、3檢測結果看，SciTop試劑盒檢測結果與Delvotest SP試劑盒對抗生素檢查的靈敏度相同。

圖2

圖3

從檢測結果(圖4)來看，被檢89份品經SciTop試劑盒反應管和Delvotest SP試劑盒反應管檢測出9份抗生素類殘留物陽性樣品，陽性率為10.11%；國標TTC法檢測的結果為陽性樣品7份，陽性率7.87%。由此可以說明利用嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢製備的抗生素試劑盒其靈敏度要高於國標TTC法。

圖4