基本介紹
- 中文名：免疫共沉澱法
- 外文名：Co-Immunoprecipitation
Co-IP - 出處：免疫學原理
基本原理,實驗步驟,
基本原理
免疫共沉澱技術（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）以抗體和抗原之間的專一性結合作用為基礎，用於檢測和確定生理條件下蛋白質之間的相互作用。其基本原理是將細胞在非變性條件下裂解，在細胞裂解液中加入特異性的抗體，這樣抗體可以和已知的抗原形成抗原–抗體複合物，如果在系統中存在與已知抗原相互作用的蛋白質，該蛋白質也會以複合物的形式沉澱下來，經過洗脫就可以得到與已知抗原相互作用的蛋白質，然後進行SDS-PAGE及Western blotting分析。
該技術研究的相互作用的蛋白質都是經翻譯後修飾的處於天然狀態的，因此可避免人為的影響，同時可分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。但Co-IP難以檢測到弱或瞬時相互作用。此外，多個相互作用蛋白質複合物的存在也可引起Co-IP中的相互作用。
實驗步驟
（1）轉染後24-48 h 可收穫細胞，加入適量細胞裂解緩衝液含蛋白酶抑制劑冰上裂解30min, 細胞裂解液於4°C， 最大轉速離心30 min後取上清（2）取少量裂解液以備Western blot分析，剩餘裂解液加1μg相應的抗體加入到細胞裂解液，4°C緩慢搖晃孵育過夜（3）取10μlproteinA瓊脂糖珠，用適量裂解緩衝液洗3次，每次3,000 rpm離心3min；（4）將預處理過的10μlproteinA瓊脂糖珠加入到和抗體孵育過夜的細胞裂解液中4°C緩慢搖晃孵育2-4h，使抗體與proteinA瓊脂糖珠偶連；
