癌蛋白iASPP在卵巢癌耐藥機制中的作用及相關通路研究

《癌蛋白iASPP在卵巢癌耐藥機制中的作用及相關通路研究》是依託四川大學，由蔣莉莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：癌蛋白iASPP在卵巢癌耐藥機制中的作用及相關通路研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：蔣莉莉
• 依託單位：四川大學

項目摘要

卵巢癌患者的耐藥性很常見，相關領域研究一直是熱點及難點。我們前期工作發現異常高表達的癌蛋白iASPP在卵巢癌中發揮重要耐藥作用，試驗室證據提示其耐藥機制可能與securin/CDK1/cyclin B1/separase信號通路有關。本課題擬設計體內、外實驗進一步證實iASPP通過該信號傳導通路逃避細胞危象，從而發揮抵抗紫杉醇（卵巢癌一線化療藥）的作用；同時採用RT-PCR技術篩選外源性導入iASPP後呈明顯差異表達的該通路靶基因，運用螢光素酶分析和染色質免疫共沉澱法驗證iASPP的轉錄調控功能；運用雷射共聚焦顯微鏡結合免疫螢光法及免疫共沉澱法篩選並驗證iASPP與目標通路的結合蛋白。本課題旨在闡明iASPP通過securin/CDK1/cyclin B1/separase信號通路發揮耐藥性的作用機制，為預測耐藥及復發卵巢癌患者的分子靶向治療積累資料。

結題摘要

研究背景 上皮源性卵巢癌（ovarian cancer）約占卵巢惡性病變的90%，其病死率居婦科惡性腫瘤首位。究其原因，卵巢癌的耐藥性很常見，相關領域研究一直是熱點及難點。本課題組採用患者血清中紫杉醇濃度的平均值體外誘導卵巢癌細胞株死亡，結果發現在該劑量下，癌細胞以分裂危象（mitotic catastrophe）為主要死亡途徑。實驗室證據提示iASPP的耐藥機制可能與securin/CDK1/cyclin B1/separase信號通路異常所導致的癌細胞分裂危象減少有關。 主要研究內容 明確iASPP通該信號通路逃避細胞分裂危象；篩選並驗證iASPP在目標通路的靶基因或結合蛋白。 重要結果、關鍵數據及其科學意義 （一）高表達iASPP預示卵巢癌患者可能耐藥，預後更差。 （1）完成臨床病例收集，分析臨床病理特徵，隨訪已完成約90%。 （2）免疫組化: 我們觀察到iASPP主要表達於癌細胞胞漿，少部分表達在胞核（圖1），提示iASPP可能具有多種功能。統計學分析結果顯示，高表達iASPP提示更差的總體生存率（OS）和無病生存率（DFS）；iASPP在耐藥組中表達高於化療敏感組以及部分敏感組。 （二）高表達的iASPP與separase的高水平表達具有相關性；而與securin、CDK1的低水平表達相關。 （1）體內實驗：免疫組化統計學分析結果提示iASPP的表達水平與separase呈正相關；而與securin、CDK1呈負相關。 （2）體外實驗：運用Western雜交法檢測轉染外源性iASPP前後的separase、securin、CDK1以及cyclin B1的蛋白質表達水平，結果同上。 （三）iASPP不能在轉錄水平上影響securin/CDK1/cyclin B1/separase的mRNA水平，提示它們可能在蛋白質水平上存在對話。 （1）利用RT-PCR檢測轉染外源性iASPP前後securin、CDK1、cyclinB1和separase的mRNA轉錄水平，未發現陽性結果。 （2） 構建螢光素酶表達載體並與iASPP質粒共轉染癌細胞株，結果同上。 （四）已完成尋找iASPP在目標通路結合蛋白的基礎工作 本課題的科學意義在於為預測耐藥及復發卵巢癌患者的分子靶向治療積累資料。