《c-Abl在腎小球足細胞nephrin信號轉導中的作用及機制》是依託武漢大學，由丁國華擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：c-Abl在腎小球足細胞nephrin信號轉導中的作用及機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：丁國華
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
足細胞是腎小球濾過屏障的主要細胞成分，Nephrin是足細胞裂隙膜重要的結構和信號轉導分子，其表達和/或磷酸化改變與足細胞損傷密切相關，但其信號轉導機制仍不清楚。c-Abl是一種非受體酪氨酸激酶，在調節細胞存活及細胞骨架重排信號中起關鍵作用。本項目擬研究c-Abl在nephrin信號介導足細胞損傷及骨架重排中的作用及機制。通過建立血管緊張素Ⅱ輸注動物模型、培養足細胞及足細胞病病人腎活檢標本，評價c-Abl表達、分布及活性改變及其與nephrin磷酸化和足細胞損傷的相互作用；通過c-Abl表達質粒、siRNA轉染或特異性抑制劑改變c-Abl表達及活性，評價其對nephrin信號調節足細胞凋亡及細胞骨架重排的影響；通過構建缺失c-Abl不同功能域的突變質粒，與nephrin共轉染HEK293細胞，進一步明確c-Abl與nephrin之間的作用關係，為尋求有效防治足細胞損傷的新靶點提供理論依據。
結題摘要
Nephrin是足細胞裂隙膜重要的結構和信號分子，其表達和/或磷酸化水平改變與足細胞損傷密切相關，但其信號轉導機制仍不清楚。本項目旨在探討c-Abl在足細胞nephrin信號介導足細胞損傷中的作用及分子機制。本研究發現正常大鼠腎小球及體外培養小鼠足細胞中nephrin與c-Abl存在一定程度的共定位及相互作用，AngⅡ刺激可顯著減少兩者的共定位及結合，並伴隨足細胞nephrin-Akt信號改變及細胞損傷。利用c-Abl質粒轉染上調足細胞c-Abl表達可進一步增強AngⅡ誘導的Akt去磷酸化，加重足細胞損傷；而用c-Abl siRNA轉染或STI571預處理抑制c-Abl表達/活性可顯著逆轉AngⅡ誘導的Akt去磷酸化，改善AngⅡ所致的足細胞損傷。構建CD16/7-nephrin-myc嵌合質粒，轉染足細胞後以CD16誘導nephrin磷酸化，可顯著增加CD16/7-nephrin-myc嵌合質粒與c-Abl的共定位及相互作用，表明與c-Abl結合的是nephrin的磷酸化形式。構建不同結構域（SH2/SH3或FABD）缺失的c-Abl突變載體，與CD16/7-nephrin-myc嵌合質粒共轉染COS7細胞，發現c-Abl通過其SH2/SH3結構域直接與p-nephrin相結合，參與COS7細胞骨架重排的調控。正常腎組織中nephrin和c-Abl呈線性共定位於腎小球毛細血管袢，在IgAN、MCD、FSGS及MN等病理狀態下，c-Abl與nephrin共定位顯著減弱。結論：c-Abl是nephrin的下游信號分子，通過其SH2/SH3結構域與p-nephrin相結合，在AngⅡ刺激或足細胞病等病理條件下，c-Abl由nephrin解離並活化，通過Akt通路調控足細胞表型改變。
