《C末端Src激酶（Csk）調控足細胞nephrin磷酸化的作用及機制》是依託武漢大學，由任志龍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：C末端Src激酶（Csk）調控足細胞nephrin磷酸化的作用及機制
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：任志龍
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Nephrin是定位於足細胞裂隙膜的重要結構蛋白和信號轉導分子，其磷酸化改變在調節足細胞存活及骨架蛋白重組中起重要作用，但nephrin磷酸化調控機制仍不清楚。Fyn激酶是磷酸化nephrin胞內段的關鍵激酶，C末端Src激酶（Csk）是 Fyn的特異性負性調控因子。本項目擬探討Csk在足細胞正常及損傷狀態下參與調控nephrin磷酸化改變的作用及分子機制。通過血管緊張素Ⅱ輸注大鼠模型及培養足細胞，評價nephrin磷酸化及足細胞損傷，觀察Csk在足細胞表達、分布及與caveolin-1、Fyn蛋白間相互作用特點；通過siRNA下調足細胞Csk表達和在HEK293T細胞共轉染Csk突變質粒/Fyn C末端Try530突變質粒和nephrin表達質粒，分析Csk調控nephrin磷酸化改變的分子機制，明確Csk在調控足細胞nephrin磷酸化中的作用，為有效防治足細胞損傷提供新的理論依據。
結題摘要
蛋白尿是腎小球疾病常見的臨床表現，也是造成腎小球疾病進展、腎小球硬化的重要獨立危險因素。足細胞是構成腎小球濾過屏障最重要的固有細胞成分，貼附於腎小球基底膜的最外側，相鄰足突間形成特異性分子篩結構裂隙膜（slit diaphragm, SD）。足細胞損傷、SD結構破壞是引起蛋白尿及腎小球硬化的重要發病機制。Nephrin是特異表達於足細胞的重要結構蛋白和信號分子，其胞外段通過嗜同性或嗜異性結合能力與相鄰nephrin分子或與nephrin同源的neph1分子相互交聯形成SD結構；其胞內段含有進化保守的酪氨酸殘基，具有重要的信號轉導功能。在許多足細胞損傷模型中研究發現nephrin表達、分布及磷酸化水平發生改變將直接影響足細胞生物學功能。已知Src 激酶家族成員Fyn是磷酸化nephrin胞內段酪氨酸殘基的關鍵激酶，而C 末端Src 激酶（Csk）是Fyn 的特異性負性調控因子。本項目研究內容包括：1.通過建立AngII誘導的足細胞損傷模型（體內和體外）觀察Csk在足細胞中的表達及分布變化、nephrin磷酸化及Fyn 激酶活性變化，評價Csk 與nephrin、脂筏蛋白caveolin-1、Fyn 激酶等蛋白間相互作用的特點；2.通過干擾RNA技術人為調控Csk在足細胞中的表達，進一步評價Csk在nephrin磷酸化調控及足細胞損傷中的作用。研究結果發現Csk主要在足細胞胞漿中游離表達；AngII刺激足細胞後，Csk表達上調並向足細胞胞膜移動，與caveolin-1、Fyn激酶、nephrin形成蛋白複合體，Fyn激酶活性降低，nephrin磷酸化水平下降，足細胞發生凋亡、原有骨架結構破壞；Csk干擾RNA轉染足細胞後下調Csk表達50%-60%；相較AngII刺激組，Fyn激酶活性明顯增加(p＜0.05)，nephrin磷酸化水平明顯升高(p＜0.05)，足細胞凋亡率明顯下降(p＜0.05)。本項目研究結果證實Csk參與調控生理及病理狀態下nephrin胞內段磷酸化改變，進而影響足細胞生物學功能；進一步驗證nephrin磷酸化或信號轉導在維持足細胞正常生物學功能中的重要作用，為保護足細胞治療策略提供了新的理論依據。
