《Tim-3在HBV感染所致CD8+T細胞功能失調中的作用及機制研究》是依託山東大學，由馬春紅擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Tim-3在HBV感染所致CD8+T細胞功能失調中的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：馬春紅
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
HBV感染導致的細胞免疫功能紊亂，尤其是CD8+T細胞功能失調是B型肝炎發生髮展的重要原因，深入探討其機制，必將為預防和治療B肝提供新的切入點。Tim-3是近期發現的新型免疫抑制分子，參與多種免疫性疾病發生。我們的前期研究證明，慢B肝患者和小鼠B肝模型中CD8+T細胞Tim-3表達顯著升高，且Tim-3表達與患者ALT水平正相關，沉默Tim-3可上調CD8+T細胞 IFN-γ表達，而HBV轉基因鼠和HBV轉染細胞中均可檢測到Tim-3表達的上調。據此，我們提出假設：HBV感染通過調節Tim-3表達，影響CD8+T細胞功能，進而參與B肝發生。本研究擬從臨床標本、體外細胞模型和動物實驗，利用基因轉染、抗體阻斷和siRNA等多種方法研究Tim-3對CD8+T細胞功能影響及其在B肝發生中的作用。本研究的實施與完成，將為揭示HBV感染性疾病發生機制提供新的思路，同時也為探索新型治療方案提供依據。
結題摘要
流式細胞術檢測慢B肝患者外周PBMC不同淋巴細胞中Tim-3表達，結果顯示，慢B肝患者外周CD8T及NK細胞中Tim-3表達顯著高於健康對照，且CD8T中Tim-3表達與HBV滴度明顯相關，提示HBV可以調控Tim-3表達。為驗證HBV對Tim-3的表達調控作用，首先分離慢B肝患者PBMC，抽提其DNA及RNA，分別檢測HBVDNA及Tim-3mRNA，結果與上述流式結果相似，HBVDNA陽性PBMC中Tim-3mRNA顯著高於HBVDNA陰性PBMC，提示，HBV對Tim-3的轉錄具有直接調節作用。肝癌細胞轉染實驗結果證實，HBV及其編碼蛋白可以上調Tim-3轉錄及表達，Tim-3啟動子報告質粒分析證實HBV及其編碼蛋白可以促進Tim-3啟動子活性。為研究高表達的Tim-3對CD8T細胞功能的調節作用，利用流式細胞術對CD8T進行表型分析，結果發現，Tim-3+CD8T細胞表現為耗竭狀態（細胞活化，但功能抑制）。阻斷Tim-3不僅能夠抑制HBs抗原介導的CD8T應答，並且促進CD8T的活化誘導凋亡，進一步提示Tim-3高表達介導慢B肝患者CD8T耗竭。體內抑制試驗支持上述結果。NK剔除實驗發現，Tim-3抑制CD8T應答依賴於NK細胞的存在，Tim-3同樣參與調節NK細胞應答。綜上所述，本研究首次證明HBV感染介導Tim-3表達升高，進而抑制HBV特異性CD8T細胞及NK細胞應答，可能是慢B肝患者免疫耗竭的重要機制；研究結果強烈提示Tim-3是阻斷HBV慢性感染的非常有意義的潛在靶點。上述結果以第一作者及通訊作者發表標註SCI論文7篇。
