《RhoA-ROCK調控經典Wnt信號及成骨細胞分化的研究》是依託浙江大學，由吳希美擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RhoA-ROCK調控經典Wnt信號及成骨細胞分化的研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：吳希美
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們以前的研究表明Rho small GTPase家族分子Rac1調控經典Wnt信號及骨骼發育（Wu X. et, al. Cell 2008;133:340-53），然而Rho small GTPase家族其它分子調控經典Wnt信號與否以及可能的分子機制尚不清楚。我們探索性的研究表明，RhoA-ROCK活性調控經典Wnt信號、bete-catenin在細胞質的穩定和入核，以及Wnt信號支配的成骨細胞分化。以此為基礎，本項目擬首先在體外細胞模型上探索RhoA-ROCK調控經典Wnt信號和成骨細胞分化的分子機制，以及RhoA-ROCK作為經典Wnt信號的必要分子還是RhoA-ROCK作為非經典Wnt信號的分子調控經典Wnt信號。另外，利用經典Wnt信號缺失的基因修飾的小鼠進一步明確RhoA-ROCK是經典Wnt信號的必要分子與否，以及RhoA-ROCK調控經典Wnt信號支配的成骨細胞的分化。
結題摘要
以往的研究表明Rho small GTPase家族成員主要參與調控非經典Wnt信號而發揮對細胞骨架以及細胞內鈣離子濃度的調控作用。而我們最新的研究表明Rho small GTPase家族成員之一Rac1參與調控經典Wnt信號及骨骼發育（Wu X.,et al. Cell 2008;133:340-53），但是Rho small GTPase家族其他分子調控經典Wnt信號與否及可能的分子機制尚不清楚。本項目首先通過RhoA-GTP Pull Down檢測了Wnt信號對RhoA活性的影響，明確了經典及非經典Wnt信號都能夠激活RhoA。接下來通過檢測RhoA-ROCK對Lef1雙螢光素酶報告基因活性及β-catenin蛋白水平和分布的影響，明確了RhoA-ROCK確實參與調控經典Wnt信號。同時利用一系列分子生物學手段也明確了RhoA-ROCK參與調控經典Wnt信號是通過IRS1-AKT信號通路實現的，激活RhoA-ROCK後IRS1及AKT的活性受到抑制，並進一步抑制β-catenin在絲氨酸552位點的磷酸化，導致β-catenin入核減少，抑制下游基因轉錄。另外在小鼠胚胎成纖維細胞ST2上也發現RhoA-ROCK的激活能夠抑制其向成骨細胞的分化。在整體動物上，首先檢測正常小鼠在2月齡、5月齡、7月齡及10月齡的骨密度，發現小鼠骨密度隨年齡增加呈現先上升後下降的趨勢，10月齡出現最低骨密度。因此從7月齡開始灌胃給予小鼠ROCK抑制劑Fasudil，給藥3月後再次檢測小鼠骨密度。和對照組10月齡小鼠相比，給藥組10月齡小鼠骨量的丟失得到了明顯的延緩，表明RhoA-ROCK能夠通過調控經典Wnt信號而影響骨量。
