Rfx6在肝癌幹細胞乾性特徵維持中的作用及機制研究

《Rfx6在肝癌幹細胞乾性特徵維持中的作用及機制研究》是依託中山大學，由元雲飛擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Rfx6在肝癌幹細胞乾性特徵維持中的作用及機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：元雲飛
• 依託單位：中山大學

中文摘要

胚胎髮育相關基因可參與腫瘤幹細胞的調控。前期研究發現胰島發育相關基因Rfx6與肝前體細胞標記物的表達相關；肝癌組織中Rfx6高表達提示肝癌分化差及不良預後；Rfx6過表達可激活ERK蛋白並上調β-catenin表達，促進肝癌細胞增殖、遷移、侵襲及化療抵抗。因此，我們推測Rfx6可能與肝癌幹細胞特徵相關。本研究擬：⑴通過Rfx6啟動子報告系統、小鼠肝原位移植瘤模型、幹細胞球形成等實驗，探討Rfx6與肝癌幹細胞乾性特徵的關係；⑵構建Rfx6表達上調/下調的肝癌細胞模型，進一步探討Rfx6對肝癌幹細胞乾性特徵的調控作用；⑶結合ERK抑制劑，了解Rfx6-ERK-β-catenin通路對維持肝癌幹細胞乾性特徵的作用，通過ChIP-seq等篩選Rfx6調控的下游基因，探討Rfx6調控肝癌幹細胞乾性特徵的機制。本課題旨在更深入了解肝癌幹細胞的特徵，為尋找潛在分子靶點提供新的依據。

結題摘要

背景 肝細胞癌是一種具有高侵襲和轉移能力、術後易復發、機制研究尚不清楚的腫瘤。本課題組前期研究發現Rfx6與肝前體細胞標記物的表達相關並促進肝細胞癌細胞的遷移、侵襲。本研究旨在進一步闡明Rfx6在肝細胞癌中的功能及機制；明確Rfx6在肝細胞癌預後預測中的作用。 主要研究內容 qRT-PCR、IHC和Western blotting用於檢測Rfx6在肝細胞癌組織及細胞中的表達情況；幹細胞球形成、qRT-PCR等實驗探討Rfx6與肝癌幹細胞乾性特徵的關係；採用Transwell實驗明確Rfx6對肝細胞癌細胞遷移及侵襲能力的影響；通過免疫螢光和 western blotting 觀察其對細胞形態和EMT的影響；利用ChIPseq和RNAseq篩選出Rfx6調控的靶基因；利用ChIP、螢光素酶報告等實驗研究Rfx6與靶基因之間的相互作用；表達Rfx6後加入靶基因的單克隆抗體，通過Transwell實驗分析其對肝細胞癌細胞遷移和侵襲的影響；構建肝原位種植瘤轉移模型和肺轉移瘤模型研究其在體內對肝細胞癌細胞轉移的影響；通過Kaplan-Meier生存分析、單/多因素COX回歸分析研究Rfx6與肝細胞癌臨床預後之間的關係。 重要結果和關鍵數據 qRT-PCR、IHC顯示Rfx6在肝細胞癌中的表達顯著增強；幹細胞球形成等實驗結果顯示Rfx6與與肝癌幹細胞乾性特徵呈正相關；Transwell實驗表明Rfx6顯著促進細胞的遷移和侵襲；過表達Rfx6後，肝細胞癌上皮細胞呈現EMT樣改變；ChIPseq和RNAseq、免疫螢光等實驗均證實Rfx6可促進IL6介導的細胞的EMT；ChIP研究表明Rfx6可與IL6啟動子區相互作用；ChIP-qPCR、螢光素酶報告等實驗結果顯示Rfx6可與 IL6啟動子區結合併促進IL6的轉錄；在Rfx6過表達的細胞株中加入IL-6R單克隆抗體後，Rfx6對細胞遷移侵襲和 EMT 的促進作用減弱；體內實驗結果提示RFX6促進轉移；臨床結果顯示Rfx6的表達與肝細胞癌患者的臨床預後顯著相關。 科學意義 在肝細胞癌中Rfx6與肝癌幹細胞乾性特徵相關並在體內外顯著促進肝細胞癌細胞轉移；這種促癌功能主要通過促進IL6轉錄激活IL6/STAT3通路實現，Rfx6表達水平與肝細胞癌患者的臨床預後顯著相關。綜上所述Rfx6是潛在的肝細胞癌預後預測分子和治療靶點。