RNA試劑盒

用於各種植物、動物、微生物的RNA提取，在每個試劑盒里都有一份說明使用說明書。實驗者只需要按照說明書上的步驟操作即可。使用時無需配製其它試劑，非常方便，適合於RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、純度高，可用於分子生物學後實驗。但目前較好的試劑盒價格比較貴，在實驗室可以根據自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用。

基本介紹

• 中文名：RNA試劑盒
• 套用領域：分子生物學
• 作用：提取細胞內總RNA

試劑組成

（以離心柱型為例）：

一般包括：

成分	數量	儲藏溫度	有效期
裂解液	100ml	2-8℃	一年
漂洗液	30ml	RT	一年
洗柱液	100ml	RT	一年
RNasefreeddH2O	30ml	RT	一年
RNasefree吸附柱	100個	RT	一年
RNasefree收集管(2ml)	100個	RT	一年

此外，還配有一份試劑盒使用說明書，根據不同的生產商，可能還配有不同的試劑，如：DNA酶、溶菌酶等。

操作步驟

1. 樣品處理

a. 植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。

b. 動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。

c. 貼壁細胞：直接在培養板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml 裂解液。用取樣器吹打混勻。

d. 細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。

e. 血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻後室溫放置10分鐘， 10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉澱含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重複裂解步驟。離心後沉澱加入1 ml裂解液混勻。

2. 將處理後的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白複合物完全分離。

3. 向勻漿樣品中加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振盪15秒，室溫放置3-5分鐘。

4. 2-8℃ 12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中，把水相轉移到新管中，不要吸到沉澱。

5. 吸附柱前處理：在吸附柱中加入500ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min，棄廢液。

6. 第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻，加入吸附柱靜置2分鐘，2-8 12000rpm ℃ 離心2min，棄廢液。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min，棄廢液。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8 12,000 rpm ℃ 離心2min，棄廢液。

9. 12000rpm離心2min，棄掉收集管，將吸附柱置於室溫放置數分鐘將吸附柱中殘餘的漂洗液去除。

10. 將吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min

即得到RNA。

注意事項

所有相關器皿耗材都應為RNase-free產品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環境中RNA酶污染樣品。

RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這並不表示RNA不純，需電泳檢測。

使用時一定要根據自己的實驗需要購買專用提取試劑盒， 如果不是專用試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質量以及完整性，會影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、晶片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析、分子克隆等後續實驗的結果。

當前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價較高，單次實驗費用花費太大，對精度要求不高的實驗沒有必要購買，當然還有其它的進口試劑盒，但是均存在價格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內無貨的時候，要從國外發貨，會等很長一段時間）。普通的提取實驗用國產的試劑盒就足以，價格不高，基本上各地均有現貨，如天根（國內生產的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價格比進口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯，性價比還可以。

替代方法

當然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實採用一些經典的RNA提取方法，效果也很不錯，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經典的方法操作複雜一些。