鹼性磷酸酶試劑盒

鹼性磷酸酶檢測試劑（盒）是指基於分光光度法原理對人血清、血漿或其他體液中的鹼性磷酸酶活性進行體外定量分析的體外診斷試劑。

基本介紹

• 中文名：鹼性磷酸酶試劑盒
• 外文名：alkaline phosphatase colorimetric assay kit
• 分類名稱：醫療器械

工作原理

鹼性磷酸酶（ALP或AKP）是廣泛分布於人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同功酶。已發現有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5與AKP6六種同功酶。其中第1、2、6種均來自肝臟，第3種來自骨細胞，第4種產生於胎盤及癌細胞，而第5種則來自小腸絨毛上皮與成纖維細胞。

鹼性磷酸酶活性的測定方法主要有連續監測法和比色法兩類：

1. 連續監測法（磷酸對硝基苯酚底物法）
   鹼性磷酸酶催化水解磷酸對硝基苯酚（4-NPP），生成對硝基苯酚（4-NP），在特定波長處監測吸光度變化速率，可計算鹼性磷酸酶活性。
2. 比色法（磷酸苯二鈉底物法）
   鹼性磷酸酶催化水解磷酸苯二鈉，生成游離酚，酚與4-氨基安替比林結合，經鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌衍生物，在特定波長處監測吸光度值，可計算鹼性磷酸酶活性。從方法學考慮，主要指以鹼性磷酸酶水解底物引起特定產物的吸光度的改變對鹼性磷酸酶活性進行定量檢測的體外診斷試劑，不包括乾化學、酶聯免疫及金標類檢測試劑。前列腺鹼性磷酸酶試劑不屬於本指導原則涵蓋的範疇。

臨床套用

鹼性磷酸酶主要用於阻塞性黃疸、肝膽疾病、骨組織疾病等的檢查。

生理性增高：兒童在生理性的骨骼發育期，鹼性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。

病理性升高：

1. 骨骼疾病如佝僂病、軟骨病等；
2. 肝膽疾病如肝外膽道阻塞、肝硬化、毛細膽管性肝炎等；
3. 其他疾病如甲狀旁腺機能亢進。

病理性降低：見於重症慢性腎炎、兒童甲狀腺機能不全、貧血等。

使用方法

1. 試劑準備：取出所有試劑(包括檢測樣品)，恢復至室溫。標準品工作液：取15 μl p-nitrophenol溶液(10 mM)，用檢測緩衝液稀釋標準品工作液至產品要求的最終濃度。
2. 檢測方案參考如下。標準品按照規定用量使用，推薦設兩個重複。樣品通常加50 μl，如樣品中的鹼性磷酸酶活性過高，可減少樣品用量或適當稀釋後。為消除有色樣本本身顏色的影響，需設立樣品對照孔，即加入樣本，以檢測緩衝液代替顯色底物的對照。
3. 加完所有樣品後，在微孔板震盪器上震盪混勻數十秒。37°C避光孵育5-10分鐘。若待測樣品中鹼性磷酸酶活性較低，可適當延長孵育時間至30分鐘。
4. 加入終止液終止反應。
5. 檢測吸光度。如不能立即測定，可在數小時內完成測定，所顯現的黃色在數小時內穩定。
6. 結果計算：將標準品孔的OD值減去空白對照孔的OD值，校準後的標準品孔OD值與對應的p-nitrophenol濃度建立標準曲線。樣品孔的OD值減去樣品對照孔的OD值，校準後的樣品OD值代入標準曲線，計算p-nitrophenol濃度。鹼性磷酸酶活性(U/ml) = A/V/T。其中A為樣品中產生的p-nitrophenol量(μmol)；V為樣品體積(ml)；T為反應時間(min)。

注意事項

1. 請在使用前仔細閱讀說明書。
2. 請穿戴實驗防護服、手套、口罩等必要的防護裝備。
3. 樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，如EDTA、草酸鹽、氟化物和檸檬酸鹽等。
4. 樣品避免反覆凍融，建議分裝後凍存。