Klenow 酶KlenowFragment，又稱Klenow片段，是大腸桿菌聚合酶I(E.coli.DNApolymeraseI)的大片段(Large Fragment)。KlenowFragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。KlenowFragment的3'→5'外切酶活性保證了其合成DNA時的準確性(proofreading)。
基本介紹
- 中文名：Klenow 酶
- 作用：雙鏈DNA5'突出末端的補平
- 又稱：Klenow片段
- 屬於：大腸桿菌聚合酶的大片斷
特點,用途,來源,簡介,
特點
對於5'突出或3'突出的粘末端都可以催化產生平末端，用於後續的平端連線。
用途
雙鏈DNA5'突出(5'overhang)末端的補平(fill-in)；雙鏈DNA3'突出(3'overhang)的打平(也稱削平)；5'突出末端的標記；隨機引物法進行DNA標記；Sanger雙脫氧法進行DNA測序；cDNA第二鏈的合成或定點突變反應第二鏈的合成。
來源
由大腸桿菌表達，表達基因的來源為polA 基因片段。
簡介
分子量：約68kDa(單體)。
活性定義：37℃30分鐘時間內，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。
酶活性檢測條件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
純度：不含DNA內切酶，不含RNase。
酶儲存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。
緩衝液兼容性：在碧雲天的內切酶反應緩衝液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性為100%，在1X B、1X G中的活性為100%；在碧雲天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反應緩衝液中的活性為100%。
失活或抑制：75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導致KlenowFragment失活。金屬離子螯合劑，無機焦磷酸鹽(PPi)，大劑量的無機磷酸鹽(Pi)均對Klenow Fragment有抑制作用。
活性定義：37℃30分鐘時間內，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個活性單位。
酶活性檢測條件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
純度：不含DNA內切酶，不含RNase。
酶儲存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2，10mM DTT。
緩衝液兼容性：在碧雲天的內切酶反應緩衝液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性為100%，在1X B、1X G中的活性為100%；在碧雲天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反應緩衝液中的活性為100%。
失活或抑制：75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導致KlenowFragment失活。金屬離子螯合劑，無機焦磷酸鹽(PPi)，大劑量的無機磷酸鹽(Pi)均對Klenow Fragment有抑制作用。
