基因工程中的工具酶主要是指用於DNA和RNA分子的切割、連線、聚合、修飾、反轉錄等有關的各種酶系統。
基本介紹
- 中文名：末端酶系統
- 用途：DNA和RNA分子的切割
- 領域：醫學
- 酶系統：限制性核酸內切酶
酶系統,可變酶,逆轉錄酶,
末端酶系統
酶系統
限制性核酸內切酶(RE)
根據限制酶的作用特性，一般分為三類：
——Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型，其中常用的是Ⅱ型限制酶。
限制酶（Ⅱ型）識別及切割位點
特異識別及切割48個bp長度且具有迴文序列的DNA片斷，主要產生3種缺口：5ˊ－粘性末端 3ˊ－粘性末端
平端或鈍端
迴文序列
是指該部位的核苷酸序列呈180O旋轉對稱;
粘性末端
是指經內切酶特異切割後產生的5ˊ－末端突出或3ˊ－末端突出的鹼基序列相互具有互補性。
⑴產生5'-粘性末端
⑵產生3'-粘性末端
⑶產生平(頭末)端/鈍端
在切割DNA時，其切割點可以是相同的，產生平頭末端，稱為同識同切；
切割點也可以是不同的，產生3ˊ或5ˊ粘性末端，稱為同識異切。
同裂酶——同識同切、同裂酶——同識異切、同尾酶、同尾酶，指來源不同，但識別與切割順序有一定的相關性的一類酶。它們作用後產生相同的粘性末端。
可變酶
識別順序中的一個或幾個鹼基是可變的，並且識別順序往往超過6個鹼基對。如，BstpⅠ，其識別順序為GGTNACC。
DNA聚合酶
（最常用的DNA聚合酶有以下4種）
DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅰ大片段——Klenow片段、TaqDNA聚合酶、T4噬菌體DNA聚合酶、一DNA聚合酶Ⅰ
E.ColiDNA聚合酶Ⅰ（DNApolⅠ）是一個具有3種酶活性的多功能性酶。
包括：5ˊ→3ˊDNA聚合酶活性、5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性、3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性DNApolⅠ套用⑴催化DNA缺口平移反應，製備高比活性DNA探針；⑵第二條cDNA鏈的合成；⑶對DNA3’突出末端進行標記；⑷DNA序列分析。E.coliDNApol.Ⅰ催化切口平移二Klenow片段（DNApol.大片斷）Klenow片段用途⑴補齊雙鏈DNA的3ˊ末端；⑵用標記鹼基補齊3ˊ末端；⑶在cDNA克隆中，用於第二股鏈的合成；⑷DNA序列分析。三TaqDNApol（耐熱DNA聚合酶）
作用特點
（1）TaqDNApol催化DNA合成的最適溫度範圍7075℃，（2）95℃以上高溫，半小時不失活，（3）最適合用於聚合酶鏈反應（PCR）。
逆轉錄酶
特點
逆轉錄酶是一個多功能性酶，至少具有以下3種酶活性：
⑴以單鏈RNA為模板，催化合成cDNA單鏈
⑵具有RNaseH活性，能水解RNA:DNA雜交鏈中的
