《ISL1在肝癌幹細胞中的作用及其分子機制》是依託北京大學，由郭婷擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ISL1在肝癌幹細胞中的作用及其分子機制
- 項目負責人：郭婷
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝癌術後復發和轉移是導致患者死亡的最主要因素，腫瘤幹細胞被認為是復發和轉移的根源，但有關肝癌幹細胞調控的分子機制卻知之甚少。Hep11和Hep12是我們實驗室從同一肝癌病人原發和復發灶建立的一對細胞，其中Hep12多數具備腫瘤幹細胞特性，而Hep11則不致瘤。我們從這對細胞中製備了能有效識別肝癌幹細胞的Mab1B501單克隆抗體，Hep-11和Hep-12細胞對以及Mab1B501陽性和陰性細胞亞群是肝癌幹細胞研究的良好模型。我們前期工作發現ISL1在Hep12細胞以及Mab1B501陽性肝癌幹細胞中高表達，干擾ISL1表達後細胞自我更新能力和成瘤能力明顯下降，提示該基因對肝癌幹細胞惡性生物學特性有促進作用。在肝癌組織中ISL1高表達與患者生存期負相關。本研究擬此基礎上，深入探討ISL1表達的臨床意義及對肝癌幹細胞惡性生物學特性調控作用和分子機制，為揭示肝癌預後和治療提供依據。
結題摘要
肝癌術後復發和轉移是導致患者死亡的最主要因素，腫瘤幹細胞被認為是復發和轉移的根源，但有關肝癌幹細胞調控的分子機制卻知之甚少。Hep11和Hep12是我們實驗室從同一肝癌病人原發和復發灶建立的一對細胞，其中Hep12多數具備腫瘤幹細胞特性，而Hep11則不致瘤。我們從這對細胞中製備了能有效識別肝癌幹細胞的Mab1B501單克隆抗體，Hep-11和Hep-12細胞對以及Mab1B501陽性和陰性細胞亞群是肝癌幹細胞研究的良好模型。我們通過Super Array RT-PCR及Western blot，免疫螢光確認ISL1在同一病人復發（Hep-12）中的表達高於原發（Hep11）。並且ISL1高表達的在肝癌的病人預後比較差。我們利用1B501抗體篩選出具有腫瘤幹細胞特性1B501+的Hep11，Huh7, HepG2及三例肝癌病人的PDTX。通過RT-PCR、western-blot的檢測方法發現ISL1在1B501+的的細胞群中的表達明顯高於其在1B501-的細胞群。並且轉染ISL1慢病毒過表達載體Hep11，HuH7，HepG2及1B501-的兩例PDTX後，肝癌腫瘤幹細胞球體形成能力和小鼠體內成瘤能力及體內二次成瘤能力增強。反之，敲低後成球能力和成瘤能力均減弱。我們構建了HuH7-ISL1穩定細胞株後進行ChIP-sequence和RNA-sequence，尋找到ISL1的下游潛在靶基因ZEB1/ZEB2，並且經過western-blot，免疫螢光，螢光素酶分析實驗，ChIP等驗證了ISL1與NPM1形成複合物協同調控ZEB1/ZEB2的來發揮增強肝癌腫瘤幹細胞乾性的功能。本研究擬此基礎上，深入探討了ISL1表達的臨床意義及對肝癌幹細胞惡性生物學特性調控作用和分子機制，為揭示肝癌預後和治療提供依據。
