《FGF-2信號通路介導EGFR-TKIs快速獲得性耐藥的分子機制研究》是依託浙江大學，由趙瓊擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：FGF-2信號通路介導EGFR-TKIs快速獲得性耐藥的分子機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：趙瓊
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
新近研究顯示FGF-2通路作為一條酪氨酸激酶受體信號途徑，可促使NSCLC細胞在1-2天內產生針對靶向治療的快速獲得性耐藥。本課題組在兩種NSCLC細胞株中添加EGFR-TKI後, 發現不僅細胞內的EGFR表達被阻斷，還出現FGFR2蛋白和mRNA的表達上調，初步證實FGF-2信號可在部分NSCLC細胞株中被EGFR-TKI激活，但其介導耐藥的具體作用機制亟需進一步明確。本研究擬繼續在NSCLC細胞株中進一步誘導出針對EGFR-TKI的快速獲得性耐藥狀態；以細胞的增殖、凋亡、侵襲和耐藥相關分子標記的突變情況為觀察指標，評估其耐藥情況，並以aRNA晶片技術對一系列下游信號分子進行檢測，篩選出相關的信號分子蛋白，以闡明FGF-2信號通路介導EGFR-TKI快速獲得性耐藥的分子通路機制，拓展腫瘤快速獲得性耐藥這一全新領域的研究，並發現新的抗腫瘤作用靶點。
結題摘要
FGF-2又稱bFGF（basic fibroblast growth factor, bFGF），是由FGF基因家族編碼的結構相關的蛋白質。FGF-2過表達與腫瘤發生髮展、腫瘤轉移、血管生成及預後密切相關。FGFR 是一類單次跨膜的酪氨酸激酶受體，其中FGFR-1和FGFR-2是FGF-2的高親和力受體，配體與受體結合後可激活下游的信號通路(包括PKC、RAS和MAPK通路)，從而介導一系列重要的生理作用。研究證實多種腫瘤可通過FGF-2過表達改變bFGF/FGFR信號通路從而促進腫瘤生長；亦有研究指出，FGFs-FGFRs的自分泌信號通路在吉非替尼耐藥的NSCLC細胞株中得到明顯活化以及NSCLC細胞株中FGFR2抑制－再激活之後，腫瘤細胞能夠針對EGFR-TKIs發生快速獲得性耐藥。然而這條通路所介導EGFR-TKIs發生快速獲得性耐藥的信號網路、分子機制及其臨床後果，目前仍然缺乏相應的研究支撐，亟需進一步的探究。 本課題第一部分構建編碼靶向FGF-2基因shRNA及基於PAS（PCR-based Accurate Synthesis）的慢病毒載體，包裝慢病毒，感染人肺癌細胞PC-9，以螢光定量PCR檢測FGF-2基因在mRNA水平的變化，以western blot 檢測FGF-2蛋白表達水平的變化，篩選出FGF-2沉默表達/高表達的細胞株，為後續FGF-2在EGFR-TKIs耐藥過程中的作用研究提供了有力的工具。 本課題第二部分對FGF-2沉默表達（PC-9-FGF2- KD）及過表達細胞株（PC-9-FGF2-OE）單用吉非替尼或聯用外源性FGF-2進行誘導，篩選並鑑定出耐藥行為明顯的細胞株，進一步確定了FGF-2參與在EGFR-TKIs所引發耐藥過程中。 本課題第三部分利用Affymetrix人全基因組3’IVT晶片檢測PC-9-NC、PC-9-FGF2- KD、PC-9-FGF2-OE，以及空白對照的PC-9細胞的差異基因表達改變，其中PI3K-AKT信號通路對FGF-2介導的EGFR-TKIs快速獲得性耐藥的發生機制可能具有重要意義。
