《ERK調控SLUG基因介導的乳腺癌細胞轉移的機制研究》是依託復旦大學，由陳浩明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：ERK調控SLUG基因介導的乳腺癌細胞轉移的機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳浩明
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腫瘤轉移是導致惡性腫瘤治療失敗和病人死亡的重要原因，揭示其發生機制研究對於治療腫瘤、提高腫瘤患者的生存率至關重要。本研究在本人近年來從事腫瘤的分子遺傳學研究的基礎上，重點揭示乳腺癌細胞轉移的分子機制，本文首先通過基因晶片Illumina whole genome BeadArray技術篩選SLUG轉錄調控的下游靶基因，通過生物信息學分析，從中篩選和腫瘤細胞轉移相關的基因（稱為基因M），進一步驗證其和細胞運動的關係，以及ERK－Fra-1-SLUG信號通路如何調控基因M的表達，然後克隆出基因M的啟動子，用其調控報告基因(螢光素酶基因)的表達，通過系列的突變分析，找出SLUG基因在基因M啟動子上的轉錄調控位點，並在動物實驗水平驗證基因M介導腫瘤細胞轉移的生物學功能。本研究立足深入揭示SLUG基因調控乳腺癌細胞轉移的分子機制，不僅具有重大的理論意義，而且為進一步的腫瘤治療打下基礎。
結題摘要
乳腺癌已成為女性中發病率及死亡率最高的腫瘤，而腫瘤細胞的轉移是乳腺癌致死的主要原因，深入揭示其分子機制迫在眉睫。已有的研究表明，上皮-間充質細胞轉換（EMT）在腫瘤的發生、發展及轉移等過程中扮演重要角色，作為介導EMT過程的重要轉錄因子之一，SLUG基因在多種腫瘤的EMT過程及腫瘤細胞侵染轉移中的作用已持續成為研究熱點，本課題進一步揭示其分子機制。本課題中，通過慢病毒介導的RNA干擾、Illumina Bead Chip Human基因譜晶片檢測及數據分析，建立了SLUG表達干擾的MDA-MB-231乳腺癌細胞系研究體系，並利用其篩選出一系列RNA轉錄水平受SLUG調控的基因，最終將RhoGDI2基因確定為SLUG調控的靶標基因進行深入研究。通過定量PCR以及Western Bloting的檢測，我們證實了在MDA231細胞中SLUG對於RhoGDI2基因的表達在轉錄和翻譯水平都確實存在著正向調控。進一步在MDA231細胞中分析了SLUG對RhoGDI2信號通路的下游蛋白（RhoA、Rac1和Cdc42）的調控情況，RhoGTPases活性分析實驗表明SLUG同RhoA蛋白的表達之間存在正相關，並對於Rac1以及Cdc42兩種RhoGTPase的表達和激活均存在著較為明顯的正向調控作用。進一步的通過免疫螢光實驗，我們對於RhoGDI2蛋白在細胞內的表達定位進行了研究，結果表明細胞內SLUG基因的表達干擾會使得RhoGDI2蛋白更多的分布於細胞質中，由此推測由SLUG引起的RhoGDI2細胞內定位改變可能對於SLUG調控RhoGTPases的活性具有重要意義。此外，通過深入探索，我們發現SLUG對於RhoGTPases相關下游信號通路中重要蛋白JNK的表達、磷酸化水平以及AP-1家族成員c-Jun蛋白的表達也具有相應的正向調控作用。另外，通過體外螢光素酶報告系統實驗，我們還發現細胞內c-Jun蛋白的過表達對於RhoGDI2基因啟動子的激活以及其相應蛋白的表達上調具有顯著的影響，表明SLUG可能通過c-Jun的介導，調節RhoGDI2基因表達。總之，本課題篩選到了SLUG作用的靶基因RhoGDI2，並對SLUG、RhoGDI2以及RhoGTPases之間的相互關係進行了較深入的探索，進一步揭示了SLUG在乳腺癌細胞中的分子機制。
