《BRCA1促進神經元存活的DNA雙鏈斷裂的修復機制》是依託中山大學，由莊菁擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：BRCA1促進神經元存活的DNA雙鏈斷裂的修復機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：莊菁
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
DNA雙鏈斷裂、DNA修復缺陷是神經元損傷變性的特徵之一，如何促進DNA正確修復對神經元保護具有重要意義。我們前期研究證實，BRCA1能有效提高神經元內DNA的完整性；通過腺病毒感染表達外源性BRCA1能夠有效地促進神經元存活。那么，BRCA1促神經元存活的機制是什麼？本課題以大鼠視網膜神經節細胞為研究載體，①證實BRCA1通過與Rad51、Ku80作用促進DNA雙鏈斷裂的有效修復；②通過轉染帶綠色螢光蛋白標記的DNA雙鏈修復系統的質粒、流式細胞儀檢測、G染色體顯帶等技術，定性、定量證明BRCA1通過直接同源重組(DHR)以及保守型非同源末端結合(NHEJ-C)調控神經元內DNA的修復，從而促進神經元存活；③誘導內源性BRCA1表達，探討其修復DNA以及促神經元存活的作用。本研究將提出BRCA1促神經元存活的新功能並闡明其具體的分子機制，為神經退行性疾病、神經系統損傷防治提供新的基因靶點。
結題摘要
DNA雙鏈斷裂、DNA修復缺陷是神經元損傷變性的特徵之一，如何促進DNA正確修復對神經元保護具有重要意義。本課題前期實驗證實了BRCA1通過與Rad51、Ku80等作用促進DNA雙鏈斷裂的有效修復。因此（1）本課題套用5-Aza誘導神經元細胞內源性KU80的表達，並且構建DNA損傷修復模型發現KU80參與神經細胞的DNA修復。（2）通過構建HR及NHEJ質粒，模擬細胞內DNA雙鏈斷裂模型，通過檢測細胞DNA斷端重連效率發現Rb基因促進視網膜母細胞瘤細胞的同源末端連線。（3）通過RT-PCR及western檢測小鼠視網膜細胞上BRCA1基因的表達，並通過質粒重連實驗檢測小鼠視網膜細胞的DNA修復能力。（4）我們發現TSA誘導分化的視網膜前體細胞及siRNA敲除BRCA1表達的視網膜前體細胞均表現DNA損傷修復能力的嚴重下降。（5）通過轉染帶綠色螢光蛋白標記的DNA雙鏈修復系統的質粒、流式細胞儀檢測、G染色體顯帶等技術，定性、定量證明BRCA1通過直接同源重組(DHR)以及保守型非同源末端結合(NHEJ-C)調控神經元內DNA的修復，從而促進神經元存活。本課題證實BRCA1，KU80及Rb基因均參與了DNA損傷修復，特別是BRCA1通過調節非同源末端連線促進視網膜神經元細胞的DNA損傷修復。該研究為探索如何促進神經細胞DNA損傷修復提供了新的思路和前景。
