BCA蛋白濃度檢測是一個實驗，是根據吸光值可以推算出蛋白濃度.鹼性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，兩分子BCA螯合一個Cu+。將該水溶性複合物在562nm處的吸收值，與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
基本介紹
- 中文名：BCA蛋白濃度檢測
- 外文名：BCA assay
- 實驗試劑：BCA試劑，標準蛋白質溶液
- 實驗操作：繪製標準曲線
- 試驗方法：根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
簡介,實驗試劑,實驗操作,
簡介
二價銅離子在鹼性的條件下，可以被蛋白質還原成一價銅離子，一價銅離子和獨特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的BCA螯合一個銅離子，形成紫色的反應複合物。該水溶性的複合物在562nm處顯示強烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛範圍內有良好的線性關係，因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
測定方法：
實驗試劑
(1) BCA試劑的配製
① 試劑A，1L：分別稱取10g BCA (1%)，20g Na2CO3·H2O(2%)，1.6g Na2C4H4O6·2H2O(0.16%)，4g NaOH (0.4%) ，9.5g NaHCO3(0.95%) ，加水至1L，用NaOH或固體NaHCO3調節pH值至11.25。
②試劑B，50ml：取2g CuSO4·5H2O (4%)，加蒸餾水至50ml。
③BCA試劑：取50份試劑A與1份試劑B混合均勻。此試劑可穩定一周。
(2)標準蛋白質溶液：稱取0.5g牛血清白蛋白，溶於蒸餾水中並定容至100ml，製成5mg/ml的溶液。用時稀釋十倍。
實驗操作
繪製標準曲線：
取96孔酶標板，按下表加入試劑。
管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
標準蛋白溶液（μl）蒸餾水（μl） BCA試劑（μl） 蛋白質濃度（mg/ml） | 0 20 200 0 | 1 19 200 0.025 | 2 18 200 0.05 | 4 16 200 0.1 | 8 12 200 0.2 | 12 8 200 0.3 | 16 4 200 0.4 | 20 0 200 0.5 |
上述試劑加完後，準確吸取20μl樣品溶液於酶標孔中，加入BCA試劑200μl，輕搖，於37℃保溫30-60min，冷卻至室溫後，以空白為對照，在酶標儀上562nm處比色，以牛血清白蛋白含量為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪製標準曲線。以標準曲線空白為對照，根據樣品的吸光值從標準曲線上查出樣品的蛋白質含量。
