ripa裂解液

RIPA主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用於常規的Western、IP等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關於不同的RIPA裂解液以及我們生產的其它裂解液的主要特點和差異，以及如何選擇裂解液可參考附錄。

基本信息

組成： 50 mMTris-HCl(pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40,

0.1% SDS.(配有一支PMSF).使用RIPA裂解達到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由於含有較高濃度的去污劑，不能用Bradford法測定RIPA裂解後的蛋白濃度。

保存： 4℃；避光

成分

RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%TritonX-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。

RIPA裂解液(中)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate。

使用方法

對於培養細胞樣品：

1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

2.對於貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒後，細胞就會被裂解。

對於懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解後應沒有明顯的細胞沉澱。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然後再裂解。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對於組織樣品：

1. 把組織剪下成細小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。

3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解後，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行後續的PAGE、Western和免疫沉澱等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪下後直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然後同樣離心取上清，用於後續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

註：RIPA裂解液的裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組

DNA等的複合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用於後續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨後離心取上清用於後續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如NFκB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

用途

產品名稱	Western及IP細胞裂解液	RIPA裂解液（強）	RIPA裂解液（中）	RIPA裂解液（弱）	NP-40裂解液	SDS裂解液
有效裂解成分	1% Triton X-100	1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS	1% NP-40, 0.5% deoxycholate	1% NP-40, 0.25% deoxycholate	1% NP-40	1% SDS
裂解強度	溫和	強	中	溫和	溫和	強
對膜蛋白的提取	一般	很好	較好	一般	一般	很好
對胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好
對核蛋白的提取	較好	很好	較好	較好	較好	很好
胞漿磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好
細胞核轉錄因子提取	很好	很好	很好	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制劑	是	是	是	是	是	是
含磷酸酯酶抑制劑	是	是	是	是	是	是
主要用途	WB, IP,co-IP	WB, IP	WB, IP	WB, IP, co-IP	WB, IP,co-IP	WB, ChIP