《Aurora-A通過抑制細胞衰老介導卵巢癌化療抵抗的機制研究》是依託復旦大學，由孫會貞擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Aurora-A通過抑制細胞衰老介導卵巢癌化療抵抗的機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孫會貞
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Aurora-A激酶與細胞衰老均可調節細胞有絲分裂和周期，並對腫瘤發生、發展、治療等具有重要影響。申請人在文獻報導以及前期研究基礎上，發現Aurora-A在約半數卵巢癌組織中高表達，且可抑制p53/p21，p16/Rb，BRCA1/2等促衰老蛋白表達。細胞衰老增加腫瘤化療敏感性，此與Aurora-A介導多種腫瘤化療抵抗的作用相反。我們推斷Aurora-A與細胞衰老以及卵巢癌化療敏感性之間存在重要關聯。預實驗結果表明，Aurora-A明顯降低卵巢癌細胞衰老水平以及紫杉醇化療敏感性，並影響衰老相關蛋白表達。最終本申請者提出假說 “Aurora-A可通過抑制細胞衰老介導卵巢癌化療抵抗”。本項目擬在卵巢癌中從分子、細胞、動物和組織臨床水平上，探討Aurora-A與細胞衰老，化療敏感性之間的關係以及其機理，並尋求新的藥物靶向分子，為Aurora-A高表達卵巢癌的全面治療找到新的方法。
結題摘要
背景和目的 Aurora-A 是絲/蘇氨酸蛋白激酶家族的成員之一，在包括卵巢癌在內的多種腫瘤組織中均高表達。Aurora-A與細胞衰老均可調節細胞有絲分裂和周期，並參與腫瘤發生、發展以及化療抵抗。我們擬通過研究Aurora-A與細胞衰老的關係揭示其誘導卵巢癌化療抵抗的機制，為卵巢癌治療尋找新的治療靶點，以期得到更充分的治療。 方法 通過反轉錄病毒轉染/感染Aurora-A高表達卵巢癌細胞系OVCA 429以及SKOV3，建立Aurora-A基因沉默細胞系，以空白載體轉染的細胞係為對照。Western Blot檢測目的蛋白Aurora-A表達水平。套用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)試劑盒進行細胞增殖試驗及其奧拉帕尼處理細胞後的細胞毒性測定。流式細胞術檢測細胞凋亡水平變化。β-半乳糖苷酶染色檢測奧拉帕尼處理卵巢癌細胞後Aurora-A對卵巢癌細胞衰老的影響。Western Blot檢測衰老相關蛋白的變化，發現幹細胞因子八聚體結合轉錄因子（OCT4）在Aurora-A沉默後低表達。將OCT4在卵巢癌細胞系中基因沉默檢測其對卵巢癌細胞增殖、化療敏感性和細胞衰老的影響。構建裸鼠皮下移植瘤模型，繪製腫瘤生長速度曲線，處死裸鼠後對組織標本進行免疫組化、β半乳糖苷酶染色、免疫螢光。最後進行相關臨床資料分析，Kaplan-Meier 生存分析檢測Aurora-A表達情況與卵巢癌患者生存期關係。 結果 CCK8實驗結果顯示，Aurora-A基因沉默明顯抑制卵巢癌細胞增殖。流式細胞術及CCK8實驗結果顯示，Aurora-A基因沉默增加卵巢癌細胞凋亡，抑制細胞活力。β-半乳糖苷酶染色結果顯示，Aurora-A基因沉默促進卵巢癌細胞衰老，並下調幹細胞因子OCT4表達。CCK8試驗結果顯示OCT4基因沉默明顯抑制卵巢癌細胞增殖，增加奧拉帕尼細胞毒性。流式細胞技術結果顯示OCT4基因沉默增加化療敏感性。β-半乳糖苷酶染色結果顯示，OCT4基因沉默促進卵巢癌細胞衰老。動物實驗顯示，Aurora-A基因沉默抑制卵巢癌增殖，促進腫瘤衰老，且OCT4表達低水平。Kaplan-Meier生存分析顯示Aurora-A高表達卵巢癌患者總生存期及無進展生存期短。 結論 Aurora-A或可通過幹細胞因子OCT4抑制卵巢癌細胞衰老，最終引起化療抵抗。OCT4或可成為卵巢癌治療新的靶向分子。
