雙縮脲試劑是一個用於鑑定蛋白質的分析化學試劑。它是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。會遇到蛋白質顯紫色。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲，由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑑定反應的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅，而氫氧化鉀僅僅是為了提供鹼性環境，因此它可被其他鹼，如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀，會延長試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護反應生成的絡離子不被析出變為沉澱,從而使試劑失效。
基本介紹
- 中文名：雙縮脲試劑
- 英文名：Biuret Reagent
- 套用：驗證蛋白質的存在
- 相關反應：雙縮脲反應
- 製作：雙縮脲試劑A、雙縮脲試劑B合成
簡介,反應原理,配製,注意事項,與雙縮脲區別,方法學評價,
簡介
血清蛋白測定(雙縮脲法)試劑：球蛋白沉澱劑同上頁酚試劑法。雙縮脲試劑：硫酸銅(CuSO4·5H2O,三級試劑)1.5克，酒石酸鉀鈉(KNaC4H生O6·4H2O,三級試劑)6.0克2.5N氫氧化鈉，300毫升，蒸餾水。將硫酸銅及酒石酸分別各以200毫升蒸餾水溶解,必要時過濾,全部傾入1,000毫升容量瓶中,混勻。再加入氫氧化鈉溶液並以蒸餾水稀釋至1,000毫升刻度。分裝塑膠或內壁塗蠟的試劑瓶,加塞密封,於室溫保存。姐溶液中出現暗紅色沉澱即不宜再用。
反應原理
需要注意的是，能與雙縮脲試劑發生紫色反應的化合物分子中至少含有兩個肽鍵。因此，二肽無法用它來檢驗。
配製
雙縮脲試劑A是質量分數為0.1 g/mL的NaOH水溶液；
雙縮脲試劑B是質量分數為0.01 g/mL的CuSO4水溶液.
先在待測液中加入雙縮脲試劑A 3mL，振盪均勻（營造鹼性環境），再加入1～2滴雙縮脲試劑B，振盪均勻。如果待測液里含有蛋白質，那么會看到溶液變成紫色。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。
蛋白質的肽鍵在鹼性溶液中能與Cu2+絡合成紫色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
注意事項
在使用雙縮脲試劑時候，必須注意，必須是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液，再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液。若先加入硫酸銅[CuSO4]溶液，再加入氫氧化鈉[NaOH]溶液，則無法充分製造鹼性環境，此時CuSO4會與NaOH發生複分解反應，生成藍色氫氧化銅[Cu(OH)2]沉澱，導致現象不清，無法較好地達到實驗目的。
與雙縮脲區別
雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物。
雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A和雙縮脲試劑B兩種試劑組成
雙縮脲試劑A的成分是氫氧化鈉的質量分數為0.1 g/mL的水溶液；
雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質量分數為0.01 g/mL的水溶液。
雙縮脲試劑可以驗證蛋白質的存在，遇蛋白質產生紫色。
簡單的說， 雙縮脲是一種化學物質，而檢測蛋白質用的那兩個試劑之所以叫雙縮脲試劑，是因為檢測原理和雙縮脲的形成相似。
方法學評價
雙縮脲（NH2CONHCONH2）是兩個分子脲經180℃左右加熱，放出一個分子氨後得到的產物，在強鹼性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物，雙縮脲反應產生的紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及胺基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。
優點：雙縮脲法測定蛋白質的測定範圍是1~10mg蛋白質，操作簡單、快捷。既適合手工操作，又適合自動化分析，重複性好、線性關係好， 雙縮脲試劑可以長期保存（ 若貯存瓶中有黑色沉澱出現，則需要重新配製）。
缺點：靈敏度差，測定範圍窄，樣品需要量大，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，因此它常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。 干擾測定的物質包括有：在性質上是胺基酸或肽的緩衝液，如TrIs緩衝液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉澱。
