《重複移植非造血幹細胞對梗死心肌修復機制的研究》是依託揚州大學，由顧翔擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：重複移植非造血幹細胞對梗死心肌修復機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：顧翔
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
心肌梗死（MI）後心力衰竭（HF）是嚴重威脅人類健康的主要疾病，目前的常規治療效果不滿意。而單次非造血幹細胞(NHSCs)移植在治療MI-HF過程中，存在細胞存活少，療效受限等問題。我們在15例臨床研究中，採用重複NHSCs移植，可改善MI-HF患者的心功能；同時開展了豬NHSCs分離培養技術；建立了MI-HF豬模型並進行了重複NHSCs移植的初步探索。在此基礎上本課題擬套用小型豬的極小胚胎樣幹細胞（VSEL-SCs）、骨髓基質幹細胞（MSCs）經冠狀動脈重複移植治療MI－HF，示蹤細胞存活、分化及細胞因子變化情況，闡明NHSCs重複移植對心功能和心肌灌注的影響；比較VSEL-SCs、MSCs移植的療效；探索首次移植後產生的細胞因子調控再次移植NHSCs的歸巢、分化，以及重複移植對梗死心肌的修復和改善疾病的預後作用，豐富幹細胞研究內容，為重複移植策略提供新思路和依據。
結題摘要
目的：旨在比較免疫螢光染色激活細胞分選（FACS）方法、免疫磁珠細胞分選(MACS)法、Ficoll密度梯度離心法分離豬VSEL-SCs的效果，並進行體外鑑定、培養擴增，為進一步研究VSEL-SCs移植治療MI-HF建立基礎。 試驗動物和方法：小型豬10頭。1、幹細胞分離 a、FACS分選法分離VSEL-SCs，局麻下從豬髂後上棘提取骨髓，經紅細胞裂解液沖洗去除紅細胞碎片，經FACS分選 VSEL-SCs，用流式細胞儀檢測VSEL-SCs的表面標記物。b、MACS分選豬VSEL-SCs：經紅細胞裂解液沖洗，離心收集，加入一抗和二抗包被的超微磁珠，將分離柱安裝入磁場中分離。C、Ficoll密度梯度離心法分離MSCs，局麻下從豬髂後上棘提取骨髓，通過梯度離心的方法先對骨髓進行分離，去除大部分紅細胞、脂肪細胞和血小板，獲得純度較高的單個核細胞。提取單個核細胞層細胞培養24h待大量細胞貼壁後，經過多次換液與傳代去除培養瓶內懸浮未貼壁的造血細胞，MSCs逐漸得到進一步純化。2、幹細胞培養、鑑定：a、分選後收集細胞，予固化、包埋進行透視電鏡觀察細胞顯微結構。b、分選後加入條件培養基培養，一定時間後採用螢光標記抗體標記，進行間接免疫螢光染色和鹼性磷酸酶染色鑑定，倒置相差顯微鏡觀察細胞形態，精確計數。 結果：FACS和MACS分選法均能從豬骨髓中分選出VSEL-SCs，但數量極少，占骨髓中總單核細胞的0.01～0.03%。通過免疫螢光染色證實其表達胚胎樣標誌Nanog，SSEA-1，Oct-4，Sox-2；非造血幹細胞標誌Lin−CD45−；和其它幹細胞標誌： CXCR4+，鹼性磷酸酶染色陽性。透視電鏡顯示VSEL-SCs十分細小，5～7微米，細胞超微結構表現為細胞核大、細胞質少。 結論：1、與經典FACS分選法相比，MACS分選VSEL-SCs細胞得率高，耗時短。2、VSEL-SCs分離只能用紅細胞裂解法，而Ficoll密度梯度離心法分離VSEL-SCs 會丟失大量目標細胞。3、在通常培養條件下，豬VSEL-SCs離體擴增較困難。
