酶的交聯法固定化技術

該技術是利用雙功能或多功能試劑（交聯試劑）在酶分子之間、酶分子與惰性蛋白間或酶分子與載體間進行交聯反應，形成共價鍵連線來製備固定化酶的方法。

基本介紹

• 中文名：酶的交聯固定化技術
• 研究領域：化學生物學、醫學、生命科學
• 套用領域：醫藥、食品、化工等
• 優勢：提高酶活性、穩定性
• 劣勢：價格高昂
• 反應條件：要求高

常用交聯試劑

戊二醛、己二胺、順丁烯二酸酐、雙偶氮苯、異氰酸衍生物等

交聯法種類

酶交聯法

是向酶液中加入交聯試劑，在一定條件下使任意酶分子之間發生交聯而形成固定化酶的方法。酶交聯法的酶固定過程與酶濃度、pH 值、離子濃度、溫度及反應時間有關，但酶在交聯過程中容易失活。

實例：0.2%木瓜蛋白酶和0.3%戊二醛在pH 值為5.2~7.2，0℃，24h即可實現交聯。

惰性蛋白交聯法

是酶與惰性蛋白在交聯劑的作用下發生交聯的方法。其機械強度優於酶交聯法。將酶蛋白和惰性蛋白交聯後，可減少目的酶活力的降低。

實例：惰性蛋白可用膠原或動物血清白蛋白等。此法可製成酶膜或在混合後經低溫處理及預熱製成泡沫狀共聚物，也可製成多孔性顆粒。

載體交聯法

是同一多功能試劑一部分化學集團與載體偶聯，而另一部分集團與酶分子偶聯的方法。該方法可以使載體和酶牢固結合，並且可以長時間使用，但其缺點在於交聯過程中酶容易失活。

實例：葡萄糖氧化酶、丁烯-3、4-氧化物和丙烯醯胺共聚即可得穩定的固定化葡萄糖氧化酶。

交聯過程

交聯法是用多功能試劑進行酶蛋白之間的交聯，使酶分子和多功能試劑之間形成共價鍵，得到三向的交聯網架結構，除了酶分子之間發生交聯外，還存在著一定的分子內交聯。根據使用條件和添加材料的不同，可產生不同物理性質的固定化酶。其交聯過程可分為：

（1）交聯劑與酶直接作用

（2）酶吸附在載體表面上再經受交聯

（3）多功能團試劑與載體反應得到有功能團的載體，再連線酶。

技術優點

（1）良好的熱穩定性和貯藏性

（2）良好的操作及保存穩定性

（3）良好的催化活性

技術缺點

有的方法固定化操作較複雜，進行化學修飾時易造成酶失活。交聯劑一般價格昂貴，此法也很少單獨使用，科研工作者一般都將其作為其他固定化方法的輔助手段，以達到更好的固定效果。