基本介紹
- 中文名：酯酶染色
- 操作方法：固定、染色、復染、氟化鈉抑制
- 臨床意義：可進行急性白血病的鑑別診斷
操作方法,注意事項,正常參考值,臨床意義,
操作方法
1.固定
根據不同的酯酶配置不同的固定液，將乾燥的骨髓塗片置於固定液中固定一段時間，固定後可水洗，去除固定液。常見的固定液有10%甲醛-甲醇固定液、10%甲醛-生理鹽水固定液、40%甲醛等。
2.染色
取酯酶對應的底物溶於適當溶劑，並與緩衝液、重氮鹽配置成pH合適的作用液，將水洗後的骨髓塗片置於作用液中於37℃環境中作用一段時間，作用後水洗，乾燥。
3.復染
用特定染液進行復染，復染後水洗，乾燥，進行鏡檢。常用的復染染液有蘇木素染液、甲綠水溶液等。
4.氟化鈉抑制試驗
在1mL作用液中加入1.5mg氟化鈉，其餘染色步驟同上，分別油鏡計數，計算出抑制前後的陽性率或積分，可計算抑制率。
注意事項
1.α-醋酸萘酚酯酶、醋酸AS-D萘酚酯酶及α-丁酸萘酚酯酶染色需加做氟化鈉抑制試驗並計算氟化鈉抑制率。
2.部分試驗對標本片有較高要求，需在取材後及時進行染色。
3.應保證染色時溫度的穩定，溫度較低時應在37℃溫箱內操作，使基質充分溶解。
4.根據胞質內沉澱染色的顏色深度、面積等對反應強度進行判斷，可分為陰性、弱陽性、陽性、較強陽性、強陽性等。
正常參考值
1. 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中出現紅色沉澱。
2. 酸性α-醋酸萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中出現紅色沉澱。
（1）單核細胞系統：呈強陽性。
（3）其他細胞：粒系細胞、紅系細胞、巨核系細胞含量較少。
3. α-醋酸萘酚酯酶染色
陽性為細胞質中棕黑色或灰黑色沉澱。
（1）單核細胞系統：分化差的原單細胞呈陰性，分化好的原單細胞呈較強陽性，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性，該陽性反應可被氟化鈉抑制。
（2）粒細胞系統：各階段粒細胞呈陰性反應，少數呈弱陽性，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系統：各階段淋巴細胞多數呈陰性反應，少數呈弱陽性，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）其他細胞：巨核細胞和血小板呈陽性反應，幼紅細胞大多數呈陰性，少數呈弱陽性，且不能被氟化鈉抑制；漿細胞呈陰性。
4. 醋酸AS-D萘酚酯酶染色
陽性反應為細胞質內出現藍色沉澱
（1）粒細胞系統：原粒細胞呈陰性或陽性反應，早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性，該反應不能被氟化鈉抑制。
（2）單核細胞系統：原單核細胞呈陰性或陽性反應，幼稚單核細胞和單核細胞均呈陽性，該反應可被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞：淋巴細胞呈陰性或弱陽性反應，該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
（4）紅細胞系統：早期幼紅細胞可呈陽性反應，隨著細胞的成熟陽性反應程度逐漸減弱，該反應不能被氟化鈉抑制。
（5）巨核細胞和血小板均呈陽性反應。
5. α-丁酸萘酚酯酶染色
陽性反應為細胞之內出現紅色沉澱。
（1）粒細胞系統：各階段粒細胞均呈陰性反應。
（2）單核細胞系統：分化差的原單細胞呈陰性反應，分化好的原單細胞呈陽性反應，幼稚及成熟的單核細胞呈陽性反應，該陽性反應可被氟化鈉抑制。
（3）淋巴細胞系統：淋巴細胞呈陰性或陽性反應。
（4）巨核細胞、幼紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性，組織細胞也可呈弱陽性，但不能被氟化鈉抑制。
臨床意義
通過不同的酯酶染色可進行急性白血病的鑑別診斷。
1. 氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
此染色反應特異性強，急性粒細胞白血病的原始粒細胞多呈陽性，急性單核細胞白血病細胞幾乎呈陰性；急性淋巴細胞白血病細胞呈陰性，戈謝細胞和曼尼-匹克細胞為陰性，海藍細胞為陰性或弱陽性，組織嗜鹼細胞為陽性，多發性骨髓瘤細胞為陰性。
2. 酸性α-醋酸萘酚酯酶
此染色反應臨床上主要用於鑑別T、B淋巴細胞。
（1）鑑別T、B淋巴細胞：成熟T淋巴細胞呈點狀顆粒或塊狀陽性，B淋巴細胞大多呈陰性，偶見稀疏、彌散的細小顆粒。
（2）鑑別急性白血病類型：急性T淋巴細胞白血病常呈點狀或塊狀陽性，急性粒細胞白血病常呈陰性或弱陽性，急性顆粒異常增多的早幼粒細胞白血病呈彌散分布的強陽性，急性單核細胞白血病呈彌散分布的強陽性。
3. α-醋酸萘酚酯酶染色
此染色主要用於輔助鑑別白血病類型。急性單核細胞白血病時，單核細胞多數呈陽性反應，且可被氟化鈉抑制，抑制率在50%以上；急性粒細胞白血病時，原粒細胞呈陰性或陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病時，早幼粒細胞呈強陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；急性淋巴細胞白血病時，原始淋巴細胞為陰性反應，急性T細胞型淋巴細胞白血病可見陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。異常幼紅細胞可呈陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。巨幼細胞呈陽性反應。
4. 醋酸AS-D萘酚酯酶染色
此染色反應主要用於鑑別急性白血病的細胞類型。
急性粒細胞白血病時，原粒細胞可為陽性反應，該反應不能被氟化鈉抑制；急性早幼粒細胞白血病時，顆粒異常增多的早幼粒細胞呈陽性，該反應不能被氟化鈉抑制；急性單核細胞白血病時，單核系細胞呈陽性反應，並可被氟化鈉抑制；急性粒-單細胞白血病時，部分白血病細胞呈陽性，部分陽性反應可被抑制；急性淋巴細胞白血病時，原有淋巴細胞呈弱陽性或陽性，該反應不被氟化鈉抑制。
5. α-丁酸萘酚酯酶染色
此染色反應是急性白血病常用的細胞化學染色，其特異性較高。急性單核細胞白血病時，單核系細胞大多數呈陽性反應，該反應能被氟化鈉抑制；急性粒細胞白血病時，原粒細胞一般呈陰性反應；急性早幼粒細胞白血病時，早幼粒細胞常呈陰性反應；急性粒-單細胞白血病時，部分白血病細胞呈陽性反應，部分白血病細胞呈陰性反應；急性淋巴細胞白血病時，原始及幼稚淋巴細胞一般呈陰性反應。異常組織細胞也可呈陽性反應，但該陽性反應不能被氟化鈉抑制。
