含義
親和素是一種
糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,由於每個分子由4個
亞基組成,因此可以和4個
生物素分子親密結合。在免疫機制有起重要作用!
生物素在人體內是不能單獨起作用的,它需要與其他酶、胺基酸脂肪衍生物等結合來綜合調控。
生物素結合常數即表示了它與其他
有機分子結合能力的大小。
類型
親和素主要包括
卵白親和素、鏈親和素、卵黃親和素及類親和素等。後兩種因其
特異性親和力低,研究不多,前兩種目前已深入研究並得到廣泛套用。
親和素
親和素又稱
卵白素或抗生物素,分子量為68000,pI 10~10.5;在pH9~13緩衝液中性質均穩定,耐熱並耐多種蛋白水解酶的作用。天然親和素為鹼性蛋白,由4個相同的亞單位構成4聚體;每個親和素亞單位通過其結構中的
色氨酸殘基與
生物素中的Ureido環(I環)結合。因此,1個親和素分子存在4個與生物素分子結合位點,其結合常數(Ka)高 達1015mol/L。
通常,親和素的活性單位是以親和素結合生物素的量來表示的,即以能結合1ug生物素所需要的親和素量為1個親和素活性單位。一般1ug親和素約含13~15個活性單位。
鏈霉親和素
鏈霉親和素(SA)是與親和素(A)有類似生物學特性的一種蛋白質。是由Streptomyces avidin菌在培養過程中分泌的一種蛋白質產物,SA也可通過基因工程手段生產。SA分子量為65000,由4條序列相同的
肽鏈構成,每條SA肽鏈可以結合1個
生物素分子。因此與A一樣,每個SA分子也具有4個可與生物素分子結合位點,其結合常數與A相同為1015mol/L。約為
抗原抗體間ka(105~1011 mol/L)的1萬倍以上。
SA與A的ka雖然相同,但在實際套用中其檢測靈敏度明顯優於A,其原因是SA為 略偏酸性的蛋白。SA的每條肽鏈含159個
胺基酸殘基,其中賴氨酸、
精氨酸等
鹼性胺基酸的含量比一般親合素少,反之含
酸性胺基酸較多,其等點為6.0,較A(pI=10)為低,同時在結構中SA不含任何
糖基,而A含糖可高達10%。A的高pI及高含糖結構導致在
聚苯乙烯板和
硝酸纖維素膜上或與組織細胞DNA結合時,易產生一定程度的非特異性結合,造成較高的顯色背景,而SA較A在套用中明顯克服了這一缺點。
SA最高的活性可達18u,較A高(15u);與A一樣,每個SA分子也具有4個可與
生物素分子結合位點,故其效應相同。