螢光偏振免疫測定

螢光物質經單一平面的偏振光藍光(波長485nm)照射後,可吸收光能躍入激發態;在恢復至基態時,釋放能量並發出單一平面的偏振螢光(波長525nm)。偏振螢光的強度與螢光物質受激發時分子轉動的速度成反比。大分子物質旋轉慢,發出的偏振螢光強;小分子物質旋轉快,其偏振螢光弱。利用這一現象建立了螢光偏振免疫測定(floutescencepolarizationimmunoassay,FPIA),用於小分子物質特別是藥物的測定。
FPIA的試劑為螢光素標記的藥物和抗藥物的抗體,模式為均相競爭法,標本中的藥物與螢光標記的藥物與一定量的抗體競爭結合。反應平衡後,與抗體結合的螢光標記藥物的量與標本中藥物濃度的量呈反比。由於抗體的分子量遠大於藥物的分子量,游離的螢光標記藥物與結合抗體的螢光標記藥物所產生的偏振螢光強度相差甚遠。因此在FPIA中測定的偏振螢光強度與標本中藥物的濃度呈反比。

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