《脂肪間充質幹細胞向黑素細胞定向分化的研究》是依託江蘇大學，由李遇梅擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：脂肪間充質幹細胞向黑素細胞定向分化的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李遇梅
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
白癜風是常見的、難治的皮膚病，迄今為止沒有有效的治療方法。研究發現間充質幹細胞（MSCs）不僅具有向中胚層來源的細胞和器官分化的潛能，還可以向非中胚層來源的細胞分化，如在體內外MSCs可誘導分化為角質形成細胞等多種皮膚細胞，提示也具有向黑素細胞分化的可能。.本研究嘗試在體外培養時通過各種細胞因子誘導骨髓及脂肪來源的間充質幹細胞定向分化為黑素細胞，研究中加入SCF、Pax3、bFGF、α-MSH等因子，探討這些因子在分化過程中的作用及MSCs分化為黑素細胞所需的微環境；將MSCs靜脈及皮損內注入白癜風模型的小鼠體內，探討其在體內環境下的分化情況。.試圖建立MSCs誘導分化為黑素細胞的研究方法，比較骨髓來源與脂肪來源的MSCs分化為黑素細胞差異，取得最佳體內外培養條件，研究MSCs分化為黑素細胞的機制，為白癜風的治療提供新的切入點。
結題摘要
摘要 目的 1.建立一個體外誘導hADSCs分化為功能性黑素細胞的方法。2.探討Q開關雷射及化學脫色法對豚鼠皮膚黑素細胞的影響，從而構建白癜風動物模型。3. 將hADSCs靜脈/皮下注入白癜風小鼠體內，探討其在體內環境下分化為黑素細胞的情況。方法 1.由人皮下脂肪分離培養獲得hADSCs，流式細胞分析技術檢測細胞表型，成骨成脂分化證明分化潛能。通過添加SCF，EDN3，bFGF ，TPA，cholera toxin，FK506，L-Wnt3a及黑素細胞上清等對第5代hADSCs進行黑素誘導。6周后，予間斷NB-UVB照射，繼續誘導至第10周。使用螢光定量PCR技術實時檢測黑素相關基因：MITF，KIT，DCT，TYR，TYRP1，SOX10的表達水平。誘導結束後，通過L-DOPA染色、免疫細胞化學法（MITF、S100、HMB45）、細胞免疫螢光法（MITF， TYRP1，S100）對其進行鑑定。2.分別套用Q開關YAG雷射照射及5%的H2O2化學脫色處理豚鼠黑色皮膚，肉眼觀察皮膚顏色變化，HE染色和HMB45免疫組化染色觀察皮膚黑素細胞的變化。結果 1.通過流式鑑定，分離培養獲得的hADSCs高表達CD29，CD44，CD73，CD90，CD105，CD166，陽性率均在95%以上。低表達或不表達CD31，CD34，CD45，HLA-DR。成骨成脂分化結果顯示其具有分化潛能。PCR結果顯示，在誘導過程中，黑素相關基因逐漸表達，並有明顯上升趨勢。誘導結束後，免疫細胞化學MITF、S100及HMB45染色陽性，細胞免疫螢光結果示：MITF，TYRP1，S100陽性表達。2.Q開關YAG雷射照射3次後，黑色皮膚變為白色，同時長出白色毛髮，HE及HMB45染色後基底層未見黑素細胞。2個月後，照射區域皮膚及毛髮仍呈白色，鏡下基底層亦未見黑素細胞。而化學脫色法可使皮膚略變白，毛髮仍呈黑色，HE及HMB45染色鏡下基底層仍可見大量黑素細胞。結論 1.我們首次初步建立了將人脂肪間充質幹細胞誘導其向黑素細胞分化的方法。所誘導細胞具有黑素細胞生物及功能特性，為對黑素細胞發生髮展及臨床的進一步研究打下基礎。Q開關雷射可以構建短期穩定白癜風動物模型，為白癜風的研究提供可依據的動物模型。
