《肉與肉製品:維生素B1含量測定(GB/T 9695.27-2008)》將“試樣”一章分為“取樣”和“試樣製備”兩章；用“10精密度”及其內容代替“9允許差”及其內容；增加了“試驗報告”一章。本部分的附錄A為資料性附錄。本部分由全國肉禽蛋製品標準化技術委員會提出並歸口。本部分起草單位：中國商業聯合會商業標準中心、國家加工食品質量監督檢驗中心（廣州）、廣州市產品質量監督檢驗所。
基本介紹
- 書名：肉與肉製品:維生素B1含量測定
- 出版社：中國標準出版社
- 出版時間：2008年11月1日
- ISBN：155066134574
- 外文名：Meat and Meat Products-Determination of Vitamin B1 Content
- 語種：簡體中文
適用範圍,引用標準,測定原理,所用試劑,分析步驟,分析結果,
適用範圍
本標準規定了肉與肉製品中維生素 B1含量的測定方法。本標準適用於肉與肉製品中維生素 B1含量的測定。
引用標準
GB 9695.1 肉與肉製品 取樣方法
測定原理
試樣用酸水解使維生素 B1（硫胺素）游離，維生素B1經酶解、純化後在鹼性高鐵氰化鉀作用下定量氧化成具有藍色螢光的硫色素。在激發波長 365nm，發射波長 435nm處測定其螢光強度，螢光強度與硫色素含量成正比，以此計算維生素 B1的含量。
所用試劑
所用試劑均為分析純，水為蒸餾水或同等純度的水。
乙酸鈉（GB 694）：2 mol/L溶液。
鹽酸（GB 622）：0.1 mol/L溶液。
溴甲酚綠pH 指示劑：變色範圍：pH 值為4.0（綠）~5.8（藍）。0.1g 指示劑與0.05mol/L 氫氧化鈉溶液 2.8mL在瑪瑙乳缽中研磨溶解，以水稀至 200mL。
溴酚藍 pH指示劑：變色範圍：pH值為 3.0（黃）~ 4.6（藍）。0.1g指示劑與 0.05mol/L
氫氧化鈉溶液 3mL在瑪瑙乳缽中研磨溶解，以水稀至 250mL。
高峰澱粉酶：10%溶液。
氯化鉀（GB 646）：25%溶液。
酸性氯化鉀溶液：每升氯化鉀溶液中加入 8.5mL濃鹽酸。
氫氧化鈉（GB 629）：15%溶液。
鐵氰化鉀（GB 644）：1%溶液。
氧化劑：1%鐵氰化鉀溶液1mL，用15%氫氧化鈉溶液稀釋至100L。臨用前配製。
異丁醇。
95%乙醇（GB 679）：20%溶液。
酸性乙醇：20%乙醇溶液用0.1mol/L 鹽酸溶液調節pH 為3.4~4.3。4．14 人造沸石：市售品要經活化處理
活化方法：將粒度 40~60目的人造沸石置於燒杯中，加約 5倍量的熱水攪拌，靜置後傾出上清液棄去。重複此操作，直至上清液透明。接著加入 5倍量的 3%乙酸溶液攪拌浸泡10min，靜置後傾去上清液，重複此操作3 次。然後加入約5 倍量熱的酸性氯化鉀溶液，在沸水浴中加熱 25min，棄去上清液，加 3%乙酸溶液洗滌兩次後，用水反覆洗至無氯離子為止（用硝酸銀溶液檢查）。將處理好的人造沸石浸沒於水中保存，也可於 80℃備用。維生素 B1回收率要大於85%。
維生素 B1標準溶液
標準貯備液 100μg/mL：
稱取 50.0mg維生素 B1標準品於 500mL棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀釋至刻度，置冰櫃保存。
標準工作液 10μg/mL：
取標準貯備液 10.0mL，用酸性乙醇定容至 100mL棕色容量瓶中。
儀器和設備
5．1 | 實驗室常規設備； |
5．2 | 絞肉機：孔徑不超過 4mm； |
5．3 | 培養箱：可控制溫度 45~50℃； |
5．4 棕色具塞試管：25~40mL； | |
5．5 | 螢光分光光度計； |
5．6 | 人造沸石玻璃層析柱：構造如圖 1。 |
層析柱可控制流速為 1mL/min。準備方法：將脫脂棉置於毛細管頂端防止沸石流出和控制溶液流速。把懸浮於水中的人造沸石傾入層析柱中，其高度約 10cm（約用 1.5g人造沸石）仔細洗下貯液槽壁上的人造沸石顆粒。在吸附過程中液面要始終高於沸石表面，防止柱內有氣泡。
高壓釜。
試樣
按 GB 9695.19取樣。
取有代表性的試樣200g，於絞肉機中至少兩次使其混勻，貯於密閉器中備用。儘快分析試樣。
分析步驟
水解
稱取 4~6g試樣（精確至 0.001g）（約含維生素 B110~25μg）於 150mL具塞錐形瓶中，加入 0.1mol鹽酸溶液 50mL，攪勻，於沸水浴中水解 30min。取出冷卻至室溫。
酶解
用乙酸鈉溶液調節試樣水解液，使 pH為 4.0~4.5，用溴甲酚綠指示劑在點滴板上檢查。加入高峰澱粉酶溶液 5mL，混勻，在 45~50℃培養箱中保溫 3h。取出冷卻後 0.1mol/L鹽酸調整 pH為 3.5左右，用溴酚藍指示劑在點滴板上檢查。將溶液全部轉移到 100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。搖勻，用濾紙過濾，取濾液備用。
淨化
取酶解濾液 25.0mL，注入人造沸石層析柱，層析柱流速控制在 1mL/min左右，棄去流出液。用 3份 5mL近沸熱水洗滌層析柱，棄去流出液。用 25mL60~80℃熱的酸性氯化鉀溶液分 5次洗脫維生素 B1，收集於 25mL容量瓶中，冷卻後用酸性氯化鉀溶液定容。混勻備用。
氧化
取 2支 40mL具塞棕色試管，加入 1.5g氯化鉀或氯化鈉。再加入淨化後的樣液 5.0mL，一支試管中加入氧化劑 3mL，立即旋搖試管，混勻，加入異丁醇 10mL萃取，塞上塞子振搖 90s。靜置分層。另一支試管作為空白對照，加入 15%氫氧化鈉溶液 3mL，旋搖混勻，加入異丁醇 10mL萃取，靜置分層，異丁醇層用無水硫酸鈉脫水。
螢光測定
準備好螢光分光光度計，調節雷射波長為 365nm，發射波長為 435nm，狹縫為 5mm，取異丁醇萃取液，置於比色皿中，測定氧化樣品管中的螢光強度為 I，空白樣品管中的螢光強度為 I0。
標準測定
取維生素 B1標準工作液 2.0mL，於 150mL具塞錐形瓶中，同樣按 7.1~7.5條操作步驟進行水解、酶解、淨化、氧化、測定。氧化標準管中螢光強度為 Q，空白標準管中螢光強度為 Q0。
分析結果
計算公式
X = （I −I0）/(Q −Q0) * 20/m
式中：X——試樣維生素 B1的含量，mg/kg；I——氧化樣品管中的異丁醇液的螢光強度；I0——空白樣品管中的異丁醇溶液的螢光強度；Q——氧化標準管中的異丁醇溶液的螢光強度；Q0——空白標準管中的異丁醇溶液的螢光強度；m——試樣質量，g。
當符合允許差規定的要求時，取兩次測定結果的算術平均值作為結果。
允許差
由同一分析者同時或相繼進行的兩次測定結果之差不得超過其算術平均值的 20%。
