結核病實驗室檢測與圖解

《結核病實驗室檢測與圖解》是2021年上海科學技術出版社出版的圖書，作者是主編 盧洪洲 錢雪琴 黃海榮 主審 翁心華 趙雁林，講述了結核病實驗室檢測方法簡便易行，對臨床常用標本前處理、抗酸桿菌塗片方法及培養陽性後標本的處理進行了改進和創新。

基本介紹

• 中文名：結核病實驗室檢測與圖解
• 作者：盧洪洲、錢雪琴、黃海榮 、翁心華、趙雁林
• 出版社：上海科學技術出版社
• ISBN：9787547853443

內容簡介

本書對結核病及相關病原菌實驗室檢測相關知識做了詳細介紹，共13 章、250幅圖，包括結核病及實驗室安全防護，分枝桿菌特性及臨床送檢標本檢測、培養、菌種鑑定、藥敏試驗、各種培養基成分和配製方法等實操性內容，附錄部分還推薦介紹部分結核病相關資料查詢網站、參考書籍，並對結核病實驗室檢測人員在日常檢測工作中遇到的常見檢測問題做了解答。

書中介紹的結核病實驗室檢測方法簡便易行，對臨床常用標本前處理、抗酸桿菌塗片方法及培養陽性後標本的處理進行了改進和創新，可顯著提高結核分枝桿菌的陽性率，易被實驗室人員掌握，讓結核病患者儘早得到明確的病原學診斷，及早得到治療，避免結核分枝桿菌在人與人之間的傳播。

本書可供結核病實驗室檢測相關技術人員、結核病臨床醫生和研究人員日常查閱，也可供醫學院校檢驗系專業師生閱讀參考。

圖書目錄

章 結核病概述

一、 結核病的歷史 .........................................................................................................1

二、 結核病的流行病學及宿主易感因素 .....................................................................2

三、 結核病相關的疫苗研究 .........................................................................................3

四、 結核病的臨床表現 .................................................................................................4

五、 結核病的診斷 .........................................................................................................5

六、 結核病的治療 .........................................................................................................5

第二章 結核病實驗室安全防護

一、 實驗室存在的危險 .................................................................................................7

二、 實驗室設施和設備要求 .........................................................................................8

三、 實驗室設計原則及基本要求 .................................................................................8

四、 個人防護 .................................................................................................................9

五、 進入實驗室的要求 .................................................................................................9

六、 實驗室操作要求 .....................................................................................................9

七、 實驗室常用設備的正確使用和意外處理 ...........................................................10

八、 常用消毒殺菌方法 ................................................................................................11

第三章 分枝桿菌特性

節　結核分枝桿菌的生物學特性 ...................................................................................13

一、 染色與形態 ...........................................................................................................14

二、 培養特性 ...............................................................................................................15

三、 生化反應 ...............................................................................................................16

四、 變異性 ...................................................................................................................16

五、 抵抗力與消毒 .......................................................................................................17

第二節　非結核分枝桿菌的生物學特性 ...............................................................................17

一、 分類 .......................................................................................................................18

二、 形態 .......................................................................................................................18

三、 培養特性 ...............................................................................................................18

四、 致病性 ...................................................................................................................19

五、 藥物敏感性 ...........................................................................................................19

六、 常見非結核分枝桿菌 ...........................................................................................19

第四章 臨床送檢標本採集、運送和保存

一、 呼吸道標本的採集 ...............................................................................................23

二、 肺外標本的採集 ...................................................................................................25

三、 標本採集注意事項、運送及保存 .........................................................................26

第五章 抗酸桿菌塗片、染色及顯微鏡檢查

節　抗酸桿菌塗片處理方法及局限性分析 ...................................................................28

一、 概述 .......................................................................................................................28

二、 塗片鏡檢的優缺點 ...............................................................................................28

三、 直接塗片法 ...........................................................................................................29

四、 漂浮集菌法 ...........................................................................................................30

五、 離心沉澱法 ...........................................................................................................31

六、 消化後離心沉澱法 ...............................................................................................31

七、 塗片注意事項 .......................................................................................................35

第二節　抗酸染色及顯微鏡檢查 ............................................................................................36

一、 萋—尼抗酸染色 .....................................................................................................36

二、 改良萋—尼抗酸染色 .............................................................................................37

三、 Kinyoun抗酸染色.................................................................................................37

四、 潘本漢（Pappenheim）抗酸染色 ..........................................................................38

五、 弱抗酸染色 ...........................................................................................................38

六、 卡貝托（Gabbet）抗酸染色 ..................................................................................39

七、 改良I—K抗酸染色 ................................................................................................39

八、 顯微鏡鏡檢 ...........................................................................................................40

九、 結果判斷 ...............................................................................................................40

十、 結果判讀 ...............................................................................................................40

十一、 痰塗片抗酸桿菌濃度與塗陽機率 ...................................................................40

十二、 讀片時間與鏡檢陽性率的關係 .......................................................................41

十三、 不同離心力對塗片鏡檢及培養結果的影響 ...................................................41

十四、 標本中不同抗酸桿菌抗酸染色形態匯總 .......................................................41

第三節　螢光染色及顯微鏡檢查 ............................................................................................45

一、 原理及特點 ...........................................................................................................45

二、 LED螢光顯微鏡與傳統螢光顯微鏡比較 ...........................................................46

三、 金胺O染色 ...........................................................................................................46

四、 金胺O—羅丹明染色 ..............................................................................................47

五、 鏡檢 .......................................................................................................................47

六、 結果判斷 ...............................................................................................................47

七、 結果判讀 ...............................................................................................................47

八、 螢光染色優越性 ...................................................................................................48

九、 螢光染色局限性 ...................................................................................................48

十、 標本中不同抗酸桿菌螢光染色形態匯總 ...........................................................49

第四節　質量控制 .....................................................................................................................54

一、 室內質控 ...............................................................................................................54

二、 室間比對 ...............................................................................................................55

三、 注意事項 ...............................................................................................................55

第五節　抗酸桿菌塗片假陽性、假陰性原因分析及處理措施 ...........................................55

一、 假陽性原因分析及預防措施 ...............................................................................55

二、 假陰性原因分析及預防措施 ...............................................................................56

第六章 分枝桿菌培養

節　分枝桿菌培養概述 ....................................................................................................59

一、 概述 .......................................................................................................................59

二、 不同化學物質對分枝桿菌的生長影響 ...............................................................59

第二節　臨床標本前處理方法 ................................................................................................61

一、 概述 .......................................................................................................................61

二、 分枝桿菌培養去污染方法 ...................................................................................62

第三節　分枝桿菌培養基種類及介紹 ...................................................................................67

一、 概述 .......................................................................................................................67

二、 商品化快速培養、藥敏檢測系統 .........................................................................67

三、 液體變色培養基 ...................................................................................................68

四、 固體培養基 ...........................................................................................................68

五、 雙相培養基 ...........................................................................................................69

六、 常用培養基成分介紹 ...........................................................................................69

第四節　分枝桿菌固體培養操作程式 ...................................................................................71

一、 試劑、培養基與耗材 .............................................................................................71

二、 標本前處理 ...........................................................................................................72

三、 標本接種 ...............................................................................................................73

四、 結果觀察 ...............................................................................................................74

五、 報告方式 ...............................................................................................................74

六、 注意事項 ...............................................................................................................74

七、 室內質控 ...............................................................................................................75

八、 羅氏培養基上結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌、諾卡菌及常見

污染雜菌菌落及鏡檢形態匯總 ..........................................................................76

第五節　BACTEC MGIT 960 System全自動分枝桿菌檢測/

藥敏系統操作程式 ....................................................................................................89

一、 概況及檢測原理 ...................................................................................................89

二、 儀器硬體系統 .......................................................................................................89

三、 實驗準備 ...............................................................................................................90

四、 標本前處理 ...........................................................................................................90

五、 標本接種 ...............................................................................................................91

六、 結果報告 ...............................................................................................................91

七、 質量控制 ...............................................................................................................91

八、 儀器狀態檢查及保養 ...........................................................................................92

九、 檢測局限性 ...........................................................................................................92

十、 BACTEC MGIT 960 System培養結核分枝桿菌、非結核分枝

桿菌、諾卡菌及常見污染雜菌菌落及鏡檢形態匯總 ........................................93

第六節　BACTEC 9120全自動血培養儀 ..........................................................................98

一、 原理 .......................................................................................................................98

二、 標本培養檢測的操作步驟 ...................................................................................98

三、 報警及錯誤處理 ...................................................................................................99

四、 儀器報陽瓶處理 .................................................................................................101

五、 結果報告 .............................................................................................................101

六、 質量控制 .............................................................................................................101

七、 注意事項 .............................................................................................................102

八、 BACTEC 9120培養結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌鏡檢形態匯總 ..............103

第七節　分枝桿菌培養報陽後標本的處理 .........................................................................105

一、 BACTEC MGIT 960報陽後標本的處理 ...........................................................105

二、 血培養報陽後標本的處理 .................................................................................106

三、 羅氏培養陽性菌株轉種方法推薦 .....................................................................106

四、 羅氏培養陽性菌株塗片方法推薦 .....................................................................107

第八節　分枝桿菌培養結果影響因素分析 .........................................................................107

一、 假陽性原因分析及處理措施 .............................................................................107

二、 假陰性原因分析及處理措施 .............................................................................108

三、 分枝桿菌培養注意事項 .....................................................................................109

四、 不同培養基培養分枝桿菌敏感性差異比較 .....................................................109

五、 提高分枝桿菌培養檢出率的方法 .....................................................................109

第七章 分枝桿菌菌種鑑定

節　傳統鑑定方法及局限性介紹 ..................................................................................111

一、 結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌的區別 ..........................................................111

二、 結核分枝桿菌和牛分枝桿菌鑑定 ......................................................................113

三、 偶發分枝桿菌、龜分枝桿菌和膿腫分枝桿菌鑑定 ............................................114

四、 分枝桿菌鑑定流程圖 ..........................................................................................115

第二節　分枝桿菌免疫學檢查 ...............................................................................................115

一、 PPD結核菌素皮膚試驗介紹及局限性分析 ......................................................115

二、 γ干擾素釋放試驗（IGRA） ..................................................................................116

三、結核抗原檢測及局限性 .....................................................................................121

四、

四、 結核抗體檢測及局限性 .....................................................................................123

第八章 分枝桿菌核酸檢測及局限性分析

節　結核分枝桿菌複合群分子鑑定 .............................................................................125

一、 用於結核分枝桿菌複合群鑑定的DNA序列 ...................................................125

二、 用於結核分枝桿菌複合群鑑定的技術 .............................................................126

第二節　非結核分枝桿菌菌種分子鑑定 .............................................................................128

一、 用於非結核分枝桿菌菌種分子鑑定的DNA序列 ...........................................128

二、 用於非結核分枝桿菌菌種分子鑑定的技術 .....................................................129

第三節　結核分枝桿菌耐藥性分子檢測 .............................................................................130

一、 用於結核分枝桿菌耐藥性分子檢測的DNA序列 ...........................................130

二、 用於結核分枝桿菌耐藥性分子檢測的技術 .....................................................131

第九章 MALDI—TOF MS技術在分枝桿菌鑑定中的套用

節　MALDI Biotyper在分枝桿菌鑑定中的套用.....................................................142

一、 基本原理與流程 .................................................................................................142

二、 在分枝桿菌鑑定中的套用 .................................................................................144

第二節　VITEK MS在分枝桿菌鑑定中的套用 ................................................................148

一、 方法及原理 .........................................................................................................148

二、 樣本處理方法 .....................................................................................................148

三、 結果判讀 .............................................................................................................150

四、 操作及結果判讀注意事項 .................................................................................150

第十章 抗分枝桿菌藥物及作用特點

節　抗結核分枝桿菌藥物及作用特點 .........................................................................151

一、 異煙肼 .................................................................................................................152

二、 乙胺丁醇 .............................................................................................................152

三、 吡嗪醯胺 .............................................................................................................153

四、 利福黴素類 .........................................................................................................154

五、 氨基糖苷類 .........................................................................................................155

六、 捲曲黴素 .............................................................................................................156

七、 對氨基水楊酸 .....................................................................................................156

八、 氯法齊明 .............................................................................................................157

九、 乙硫異煙胺、丙硫異煙胺 ...................................................................................157

十、 環絲氨酸 .............................................................................................................157

十一、 氟喹諾酮類 .....................................................................................................158

十二、 利奈唑胺 .........................................................................................................159

十三、 貝達喹啉 .........................................................................................................159

第二節　抗非結核分枝桿菌藥物及作用特點 .....................................................................160

一、 大環內酯類 .........................................................................................................160

二、 四環素類 .............................................................................................................161

三、 磺胺類 .................................................................................................................162

四、 β—內醯胺類 .........................................................................................................162

五、 小結 .....................................................................................................................163

第十一章 結核分枝桿菌耐藥性及耐藥機制

節 結核分枝桿菌耐藥性 ..........................................................................................167

一、 概述 ................................................................................................................167

二、 耐藥特點 ........................................................................................................167

第二節　結核分枝桿菌耐藥機制 ......................................................................................168

一、 概述 ................................................................................................................168

二、 固有性耐藥 ....................................................................................................169

三、 獲得性耐藥 ....................................................................................................171

四、 其他機制 ........................................................................................................173

五、 系統生物學 ....................................................................................................174

六、 小結 ................................................................................................................174

第十二章 分枝桿菌藥物敏感性表型檢測

節　結核分枝桿菌的表型藥敏試驗 .........................................................................178

一、 固體藥敏試驗 ................................................................................................179

二、 液體培養基藥敏試驗 ....................................................................................180

三、 其他類型的表型藥敏試驗方法 ....................................................................181

四、 表型藥敏試驗的技術局限性 ........................................................................183

第二節　結核分枝桿菌藥敏試驗操作 .............................................................................185

一、 目的 ................................................................................................................185

二、 處理原則 ........................................................................................................185

三、 比例法固體藥敏試驗 ....................................................................................185

四、 液體藥敏試驗 ................................................................................................187

五、 質量控制 ........................................................................................................188

六、 實驗後的處理 ................................................................................................189

七、 注意事項 ........................................................................................................189

第三節 非結核分枝桿菌表型藥敏試驗 .........................................................................190

結核病實驗室檢測與圖解

一、 NTM藥敏試驗方法 .......................................................................................192

二、 NTM不同菌種藥敏試驗方法 .......................................................................193

第四節　Sensititre結核分枝桿菌/非結核分枝桿菌藥敏試驗介紹 ........................198

一、 方法原理 ........................................................................................................198

二、 適用範圍 ........................................................................................................198

三、 樣本要求 ........................................................................................................199

四、 儀器設備 ........................................................................................................199

五、 試劑耗材 ........................................................................................................199

六、 操作步驟 ........................................................................................................199

七、 質量控制 ........................................................................................................201

八、 檢驗方法的局限性 ........................................................................................205

九、 注意事項 ........................................................................................................205

十、 臨床意義 ........................................................................................................205

附屬檔案一：菌落計數程式 ........................................................................................206

附屬檔案二：藥敏板藥物分布表 ................................................................................206

第十三章 重要培養基配製

節　固體培養基的配製 ..............................................................................................209

一、 中性羅氏培養基 ............................................................................................209

二、 酸性羅氏培養基 ............................................................................................210

三、 丙酮酸鈉羅氏培養基 .....................................................................................211

四、 小川（Ogawa）培養基 ....................................................................................212

五、 蘇通（Sauton）培養基 ....................................................................................212

六、 Middlebrook 7H10與7H11瓊脂培養基 .......................................................212

七、 ATS培養基（American Trudeau Society）用於分枝桿菌培養 .....................214

八、 改良TSA—L培養基（適用於L型分枝桿菌培養） ........................................214

第二節　液體培養基配製 ..................................................................................................215

一、 Middlebrook 7H9液體培養基 .......................................................................215

二、 液體Dubos培養基 .........................................................................................217

三、 改良柯爾施納（Kirschner）培養基 ................................................................218

四、 改良普羅斯考爾（Pros—Kaur和Beck）培養基 .............................................218

五、 92—3 TB—L液體培養基 .................................................................................218

六、 92—3 TB—B液體培養基配方 .........................................................................219

第三節　固體鑑定培養基的配製 ......................................................................................219

一、 對硝基苯甲酸（PNB）羅氏培養基 ................................................................219

二、 噻吩—2—羧酸肼（TCH）羅氏培養基 .............................................................220

三、 苦味酸培養基 ................................................................................................220

四、 谷氨酸鈉瓊脂培養基 ....................................................................................221

五、 5%的氯化鈉羅氏培養基 ...............................................................................221

第四節　固體藥敏培養基的配製 ......................................................................................222

一、 固體藥敏培養基 ............................................................................................222

二、 吡嗪醯胺藥敏培養基 ....................................................................................224

第五節　液體藥敏培養基的配製 ......................................................................................225

一、 培養基製備 ....................................................................................................225

二、 質量控制 ........................................................................................................226

三、 注意事項 ........................................................................................................226

附錄一 菌株保存 228

附錄二 分枝桿菌檢測參考書介紹 229

作者簡介

盧洪洲，1966年生，主任醫師、二級教授、內科學博士、留美博士後、內科學博士生導師、護理學博士生導師、博士後流動站站長、公共衛生管理碩士生導師、公共衛生法律碩士生導師。入選國家百千萬人才工程、教育部長江學者，享受國務字特殊津貼，獲評“有突出貢獻中青年專家”。曾任上海市(復旦大學附屬)公共衛生臨床中心副主任兼感染科主任，現任上海市(復旦大學附屬)公共衛生臨床中心黨委書記、復旦大學附屬華山醫院院長助理。

錢雪琴，1972年生，畢業於復旦大學上海醫學院，碩士研究生，副主任技師。現任上海市（復旦大學附屬）公共衛生臨床中心醫學檢驗科副主任。兼任屆長三角疑難病原微生物鑑定專家委員會學術委員。從事微生物檢驗工作20年，主要負責結核病實驗室檢測工作。先後在復旦大學附屬華山醫院檢驗科、皮膚科真菌實驗室和香港威爾斯親王醫院進修、學習。

黃海榮，醫學博士，研究員，教授，博士生導師，首都醫科大學附屬北京胸科醫院國家結核病臨床實驗室主任。主要從事結核病實驗室診斷及相關基礎研究工作，曾於美國科羅拉多州立大學從事博士後課題研究。先後主持國家自然科學基金、美國NIH RePORT項目等課題；入選北京市“科技新星”計畫、北京市醫院管理中心“登峰”人才計畫；先後任WHO體外診斷策略諮詢委員會專家、中華醫學會結核病學分會基礎研究專業委員會主任委員、國家藥品監督管理局診斷試劑評審專家等多項學術任職；任BMC Infectious Disease 副主編。