糞大腸桿菌測定是通過提高培養溫度的方法，造成不利於來自自然環境的大腸菌群生長的條件，從而使培養出來的菌主要為來自糞便的大腸埃希氏菌（包括克雷伯氏菌屬）。糞大腸桿菌是總大腸菌群的一部分，主要來自糞便。測定方法分為多管發酵法和濾膜法兩種。
基本介紹
- 中文名：糞大腸桿菌測定
- 外文名：Determination of fecal coliforms
- 套用學科：環境微生物
- 適用領域範圍：環境生態
- 分類：多管發酵法和濾膜法
- 來源：糞便
簡介,實驗目的,實驗原理,測試方法,多管發酵法,濾膜法,
簡介
總大腸菌群既包括了來源於人類和其他溫血動物糞便的糞大腸桿菌，還包括了其他非糞便的桿菌，故不能直接反映水體近期是否受到糞便污染。而糞大腸桿菌能更準確地反映水體受糞便污染的情況，是目前國際上通行的監測水質是否受糞便污染的指示菌，在衛生學上有更重要的意義。
實驗目的
在測定總大腸菌群的基礎上，學會糞大腸桿菌的測定方法。
實驗原理
糞大腸桿菌在44.5 ℃培養24 h，仍能生長並發酵乳糖產酸產氣，是一類糞源性大腸菌群，也稱為耐熱性大腸菌群，包括埃希氏菌屬和克雷伯氏菌屬。實驗中通過提高培養溫度的方法，造成不利於來自自然環境的大腸菌群生長的條件，從而使培養出來的菌主要為來自糞便的大腸埃希氏菌（包括克雷伯氏菌屬）。
測試方法
測定糞大腸桿菌的方法與總大腸菌群的方法大致相同，也分多管發酵法和濾膜法兩種，區別僅在於培養溫度的不同。糞大腸桿菌的檢測多在總大腸菌群的檢測基礎上進行。
多管發酵法
（1）器材和培養基
① 器材：所用的器材除包括測定總大腸菌群所用的儀器設備外，還要有精確的恆溫培養箱，能確保溫度維持在44.5±0.2℃。
② 培養基：
（a）乳糖蛋白腖培養液：製法和成分與總大腸菌群多管發酵法相同。
（b）EC培養液：蛋白腖20.0g，乳糖5.0 g，三號膽鹽1.5 g，K2HPO44.0 g，KH2PO41.5 g，NaCI 5.0g，蒸餾水1000mL，滅菌後pH為6.9。
分裝於有小倒管的試管中，包裝後滅菌，115 ℃（相對蒸汽壓力0.072 MPa）。滅菌20 min，取出後置於陰冷處備用。
（2）方法與步驟
① 根據水樣污染程度，確定稀釋度。
② 按總大腸菌群多管法接種水樣。
③ 培養：在37 ℃培養24 h（±2 h），用接種環從產酸、產氣或只產酸的發酵管中取一環分別接種於培養液中，置於44.5±0.2 ℃溫度下培養（如水浴培養，水面應超過試管內液面）。
④ 結果觀察：若產酸產氣或產酸不產氣，均表示有糞大腸菌群存在，即為陽性。按總大腸菌群多管發酵法結果計算方法，換算成每升的糞大腸菌群數。
濾膜法
檢測糞大腸菌群的濾膜法有多種，其水樣過濾等步驟與總大腸菌群濾膜法相同，僅是培養基、培養時間和培養溫度有所不同。此處介紹兩種培養溫度的M-TEC法。其特異性和準確性均較佳。
（1）器材與培養基
① 器材：所用的器材與測定總大腸菌群所用的儀器設備相同。
② 培養基（M-TEC培養基）：蛋白腖5.0 g，酵母浸膏3.0 g，乳糖10.0 g，K2HPO433 g，KH2PO41.0 g，NaCI 7.5 g，十二烷基硫酸鈉0.2 g，脫氧膽酸鈉0.1 g，質量濃度16 g/L溴甲酚紫80 mL，溴酚紅80 mL，瓊脂15 g，蒸餾水1000 mL，pH：7.3。包裝後滅菌，115 ℃（相對蒸汽壓力0.072 MPa）滅菌20 min，取出後置於陰冷處備用。
（2）方法與步驟
濾膜過濾一定體積的水量後，平置於平板的表面，截菌面向上。先在37 ℃預培養2 h，再移至44.5±0.2 ℃下培養23～24 h，糞大腸菌群菌落呈黃色。必要時將可疑菌落接種於乳糖蛋白腖培養液中培養，觀察是否產氣，計算出1 L水樣中存在的糞大腸菌群數。
