活菌計數此法又稱活菌計數法，其原理是每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。
基本介紹
- 中文名：活菌計數
- 外文名：Live bacterial count
- 別名：活菌計數法
- 原理：活細菌可以通過生長形成菌落
- 地點：適宜溫度的培養箱或溫室
將待測樣品經一系列10倍稀釋，然後選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.2ml放入無菌平皿，再倒入適量的已熔化並冷至45℃左右的培養基，與菌液混勻，冷卻、待凝固後，放入適宜溫度的培養箱或溫室培養，長出菌落後，計數，按下面公式計算出原菌液的含菌數：
每毫升原菌液活菌數=同一稀釋度三個以上重複平皿
菌落平均數×稀釋倍數×5
此法還可以將稀釋的菌液取0.2m1加到已製備好的平板上，然後用無菌塗棒將菌液塗布整個平板表面，放入適宜溫度下培養，計算菌落數，再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數。
此法可因操作不熟練造成污染，或因培養基溫度過高損傷細胞等原因造成結果不穩定。儘管如此，由於該方法能測出樣品中微量的菌數，仍是教學、科研和生產上常用的一種測定細菌數的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
除上述兩種常用的計數方法外，還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數；比濁法原理是在一定範圍內，菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以藉助於分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度(O．D．)表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性範圍內，否則不準確。微生物計數法，發展迅速，現有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。
菌落平均數×稀釋倍數×5
此法還可以將稀釋的菌液取0.2m1加到已製備好的平板上，然後用無菌塗棒將菌液塗布整個平板表面，放入適宜溫度下培養，計算菌落數，再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數。
此法可因操作不熟練造成污染，或因培養基溫度過高損傷細胞等原因造成結果不穩定。儘管如此，由於該方法能測出樣品中微量的菌數，仍是教學、科研和生產上常用的一種測定細菌數的有效方法。土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。
除上述兩種常用的計數方法外，還有膜過濾法、比濁法。膜過濾法是當樣品中菌數很低時，可以將一定體積的湖水、海水或飲用水等樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上(或一定面積中)的細菌數；比濁法原理是在一定範圍內，菌的懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可以藉助於分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度(O．D．)表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性範圍內，否則不準確。微生物計數法，發展迅速，現有多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法。
原理：將1cm2×0.1mm的薄層空間劃分為400小格，從中均勻分布地選取80或100小格，計數其中的細胞數目，換算成單位體積中的細胞數。
適用範圍：個體較大細胞或顆粒，如血球、酵母菌等。不適用於細菌等個體較小的細胞，因為（1）細菌細胞太小，不易沉降；（2）在油鏡下看不清格線線，超出油鏡工作距離。
特點：快速，準確，對酵母菌可同時測定出芽率，或在菌懸液中加入少量美藍可以區分死活細胞。
適用範圍：個體較大細胞或顆粒，如血球、酵母菌等。不適用於細菌等個體較小的細胞，因為（1）細菌細胞太小，不易沉降；（2）在油鏡下看不清格線線，超出油鏡工作距離。
特點：快速，準確，對酵母菌可同時測定出芽率，或在菌懸液中加入少量美藍可以區分死活細胞。
平板活菌計數法
★技術要求：樣品充分混勻，操作熟練快速（15~20min完成操作），嚴格無菌操作。
★注意事項：每一支吸管只能用於一個稀釋度，樣品混勻處理，傾注平板時的培養基溫度。
★適用範圍：中溫、好氧和兼性厭氧、能在營養瓊脂上生長的微生物。
★誤差：多次稀釋造成的誤差是主要來源，其次還有由於樣品內菌體分布不均勻、以及不當操作。
★注意事項：每一支吸管只能用於一個稀釋度，樣品混勻處理，傾注平板時的培養基溫度。
★適用範圍：中溫、好氧和兼性厭氧、能在營養瓊脂上生長的微生物。
★誤差：多次稀釋造成的誤差是主要來源，其次還有由於樣品內菌體分布不均勻、以及不當操作。
