基本介紹
- 中文名：治療B肝的組合物
- 申請人：北京漢典中西藥研究開發中心
- 發明人：徐遠鶴；林德良
- 申請日：2002年10月22日
- 公布號：CN1491684
- 公布日：2004年04月28日
- 代理機構：北京雙收專利事務所
- Int. Cl.：A61K35/78；A61P1/16；A61P31/12
- 申請號：021465568
- 代理人：吳忠仁
- 地址：北京市東直門北新倉18號中國中醫研究院內北京漢典中西藥研究開發中心
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,技術領域,權利要求,實施方式,榮譽表彰,
專利背景
2002年前在中國，B肝己成為僅次於心腦血管疾病和癌症的第三大疾病，嚴重危害人民的健康和生命。2002年前B肝流行病學調查結果顯示，中國B肝發病率占全國總人口的10％左右，占世界B肝總數的1/3強。B肝屬於多發病，難治病。病機多為肝腎陰虛，疫邪侵淫營血，膠結不化，使肝氣鬱結，肝失疏瀉，損耗陰津，氣血不調。2002年前治療B肝的中成藥為數不少，但療效卓著的品種不多。
該申請的組合物，由具有30餘年中醫教學和臨床經驗的鄒經綸主任醫師組方。他在總結民間用葉下珠治療黃疸性肝炎的基礎上，配以扶正要藥雲芝和活血化瘀的丹參，套用30餘年，洽愈了數以千計的患者。中醫諸多古籍相繼記載葉下珠治療黃疸，現代文獻資料《中藥大辭典》中記載：葉下珠平肝清熱，利水解毒，治療黃疸和傳染性肝炎。美國對葉下珠的同屬植物苦味葉下珠進行臨床研究，發現用藥後37名慢性B肝患者有22名血清指標轉陰，隨訪9個月，無1例復發，而對照組僅1例轉陰。中國國內許多臨床和研究單位也對葉下珠進行了研究，發現它確實具有消除體內病毒的作用。水提部分對B肝病毒有較強的抑制作用，醇提部分對病毒具有獨特的結合溶穿活性。雲芝能雙向調節機體免疫功能，具有扶正作用。紫草具有涼血、活血、解毒作用。丹參活血化瘀，其注射液用於治療慢性、遷延性肝炎。
發明內容
專利目的
《治療B肝的組合物》的目的就是提供一種治療B肝的中藥組合物，通過藥味之間的配合，增強療效，並同時提高人體的正氣，更好地發揮抗病毒的作用。
技術方案
《治療B肝的組合物》的組合物的基本原料組成如下：葉下珠、雲芝、丹參、紫草。在該方中，葉下珠平肝清熱，利水解毒，為君藥；雲芝益氣養陰，扶正祛邪，調和陰陽，為臣藥；丹參清營涼血，活血化瘀；紫草涼血活血解毒。全方配伍精當，共奏清熱利濕解毒，扶正養陰祛邪，活血化瘀之功。
研究證明，與雲芝同屬的多孔菌科的多種菌類藥材如茯苓、豬苓、靈芝、紫芝、雲芝等均具有相似的扶正、免疫作用，藥材或提取物對肝炎具有治療作用，所以該申請中的雲芝有用多孔菌科的任意一種菌類代替。
以上是該組合物的基本方，在此基礎上加入清熱解毒、活血化瘀、益氣生津等功效的藥味，會增強本組合物的功效，也在該專利的保護範圍之內。例如，還可以加入茵陳、龍膽、金錢草、當歸和/或其它藥味，在此不一一列舉。
按重量份計，各原料的配比為：葉下珠5-20、雲芝2-8、丹參1-5、紫草1-5。
按重量份計，各原料的優選配比為：葉下珠10、雲芝4、丹參1、紫草1。
該組合物可以用藥劑學的常規方法製成所有常規的劑型，例如煎劑、煎膏劑、口服液、顆粒劑、片劑、散劑、水丸、蜜丸、膠囊劑、注射液等，原料藥可以經過提取或不經過提取製成組合物，也可以僅限於組合物中的某種原料進行提取，或將某種原料的一部分進行提取。
製備方法中所述的提取包括冷浸、熱浸、滲漉、加熱回流及其他方法，所用溶劑可以是製藥過程中常用的溶劑，如水、30-95％的乙醇等。
該組合物的優選製備方法為：葉下珠用水提取，所得提取液上大孔吸附樹脂柱吸附，用30-75％的乙醇洗脫完全，合併洗脫液，濃縮得浸膏I。葉下珠水煎煮後的藥渣用乙醇提取，得醇提液；丹參與紫草共同用乙醇提取，得醇提液，與葉下珠藥渣的醇提液合併，回收溶劑，得浸膏II。雲芝與丹參、紫草的藥渣合併，水提取，得水提取液，回收溶劑，得浸膏III。將浸膏I、II、III混勻，制粒，烘乾，可以裝入膠囊，製成膠囊劑，或製成顆粒劑、片劑。
以上製備過程可以變化，例如，雲芝不經提取，粉碎後直接加入浸膏粉中；葉下珠也可以先用乙醇提取，然後用水提取藥渣，水提取液也可以不經過大孔吸附樹脂淨化，直接回收溶劑，得到乾浸膏I。也可以將葉下珠、丹參、紫草合併，依次用乙醇和水提取，或依次用水和乙醇提取，得到醇提浸膏和水提浸膏，與雲芝合併製成膠囊，也可以在水提取時加入雲芝共同提取。總之，該申請組合物的製備方法並不限於上述具體的方案，在此基礎上的任何變化都在該申請的保護範圍之內。在製備組合物的過程中，可以加入需要的輔料和添加劑。
技術領域
《治療B肝的組合物》涉及一種治療B肝的中藥組合物。
權利要求
1.一種治療B肝的組合物，其製備所用的原料中含有以下重量配比的物質：葉下珠5-20、雲芝2-8、丹參1-5、紫草1-5。
2.根據權利要求1所述的組合物，其特徵在於所述原料的重量配比為：葉下珠10、雲芝4、丹參1、紫草1。
3.製備權利要求1或2所述組合物的方法，其特徵在於包括以下步驟：葉下珠依次用水提取和乙醇提取，得到水提液浸膏I和醇提液；丹參與紫草共同用乙醇提取，得醇提液，與葉下珠的醇提液合併，回收溶劑，得浸膏II；雲芝與丹參、紫草的藥渣合併，水提取，得水提取液，回收溶劑，得浸膏III；將浸膏I、II、III混勻，制粒，烘乾，製成膠囊劑或顆粒劑，或制粒後壓片製成片劑。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於葉下珠依次用乙醇和水提取。
5.根據權利要求4所述的製備方法，其特徵在於：葉下珠的水提取液上大孔吸附樹脂柱吸附，用30-75％的乙醇洗脫完全，合併洗脫液，濃縮得浸膏I。
6.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於：葉下珠的水提取液上H103大孔吸附樹脂柱吸附，依次用30％和60％的乙醇洗脫完全，合併洗脫液，濃縮得浸膏I。
7.鑑定權利要求1或2所述的組合物中某類成分的方法，包括以下至少一項：
（1）取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量75-95％乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發除去溶劑後，用適量75-95％乙醇提取，棄去濾液，藥渣加水適量提取，過濾，取濾液2毫升，加鹼性酒石酸銅試液4-5滴，置水浴中加熱5分鐘，生成紅色沉澱。
（2）取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量氯仿提取，如果組合物是液體，蒸發除去溶劑後，用適量氯仿提取，濾液濃縮至約1毫升，作為供試品溶液，另取葉下珠對照藥材0.5克，同法製成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點於同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10:4:1）為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；置紫外光燈365納米下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
（3）取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發除去溶劑後，用適量乙醇提取，濾液濃縮至約2毫升，作為供試品溶液，另取丹參酮IIA對照品，用乙醇製成每1毫升含2毫克的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點於同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯（19:1）為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
（4）以（3）的供試液作為供試品溶液，取在左旋紫草素對照品，加乙醇製成每1毫升含0.5毫克的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點於同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5:1:0.1）為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點；再噴以10％氫氧化鉀溶液，斑點變藍色。
8.測定權利要求1或2所述的組合物中糅質含量的方法，包括以下步驟：
取組合物適量，如果是固體，精密稱定，直接用適量水提取，如果組合物是液體，精密量取，蒸發除去溶劑後，用適量水提取，濾過，水洗殘渣，洗液與濾液合併，再加水適量，35±2℃溫熱備用；精密吸取0.5摩爾每升硫酸鋅標準溶液20毫升於500毫升容量瓶中，加0.025％甲基紅的乙醇溶液1滴，滴加氨水至溶液顯微黃色，將上述備用溶液緩緩併入容量瓶中，不斷振搖，加畢繼續振搖1分鐘，35±2℃加熱30分鐘，期間振搖數次，取出，冷至室溫，稀釋至刻度，搖勻後以乾燥濾紙濾過，棄去初濾液；精密吸取續濾液50毫升，置500毫升三角瓶中，加水300毫升，加pH為10的氯化銨-氨水緩衝溶液25毫升，鉻黑T指示劑0.1克，搖勻，用0.05摩爾每升乙二胺四乙酸二鈉標準溶液滴定，溶液由紫紅色轉為藍色為終點，並按下式計算：被測物中糅質總含量=
；其中V＝MZN×20-MEDTA×VEDTA×10；0.1556為由試驗測得的比例常數；W為稱樣量。
9.葉下珠、雲芝、丹參、紫草的組合或其提取物的組合在製備治療B肝的藥物中的用途。
10.權利要求1-9中任一權利要求所述的組合物或方法，其特徵在於其中的雲芝可以用多孔菌科的任何菌類代替，如茯苓、豬苓、靈芝、紫芝等。
實施方式
取原料：葉下珠2100克、雲芝800克、丹參200克、紫草200克。葉下珠水煎煮，過濾，所得溶液上H103大孔吸附樹脂柱吸附，水洗至無色，依次用30％及60％乙醇洗脫完全，合併洗脫液，回收溶劑並烘乾，得乾浸膏I。葉下珠水煎煮後的藥渣用乙醇回流提取，得醇提液；丹參與紫草共同用乙醇回流，得醇提液，與葉下珠藥渣的醇提液合併，回收溶劑並烘乾，得乾浸膏II。雲芝與丹參、紫草的藥渣合併，水煎煮，得水煎液，回收溶劑，烘乾得乾浸膏III。將浸膏I、II、III粉碎、混勻，制粒，烘乾，裝入膠囊，製得1000粒。每粒重約0.5克。該膠囊的通常服用量為每日3-4次，每次4-6粒。
組合物的質量控制方法：
定性方法：
（1）取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量75-95％乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發除去溶劑後，用適量75-95％乙醇提取，棄去濾液，藥渣加水適量提取，過濾，取濾液2毫升，加鹼性酒石酸銅試液4-5滴，置水浴中加熱5分鐘，生成紅色沉澱。對於用具體實施方式製得的膠囊，取樣量為4克，優選用75％乙醇20毫升超聲振盪20分鐘，棄去濾液，藥渣加水20毫升，超聲振盪20分鐘，取濾液2毫升進行顯色反應。
（2）取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量氯仿提取，如果組合物是液體，蒸發除去溶劑後，用適量氯仿提取，濾液濃縮至約1毫升，作為供試品溶液，另取葉下珠對照藥材0.5克，同法製成對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點於同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：4：1）為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；置紫外光燈365納米下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。對於用具體實施方式製得的膠囊，取樣量為1克，優選氯仿20毫升回流提取1小時，濾液濃縮至約1毫升，作為供試液，按上述方法操作，進行薄層色譜鑑別。
（3）取組合物適量，如果組合物是固體，直接用適量乙醇提取，如果組合物是液體，蒸發除去溶劑後，用適量乙醇提取，濾液濃縮至約2毫升，作為供試品溶液，另取丹參酮IIA對照品，用乙醇製成每1毫升含2毫克的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點於同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯（19:1）為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。對於用具體實施方式製得的膠囊，取樣量為2克，用乙醇15毫升超聲提取30分鐘，濾液濃縮至約2毫升，作為供試液，按上述方法操作，進行（3）和（4）所述的薄層色譜鑑別。
（4）以（3）的供試液作為供試品溶液，取在左旋紫草素對照品，加乙醇製成每1毫升含0.5毫克的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10微升，分別點於同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為粘合劑的矽膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5:1:0.1）為展開劑，展開，取出，晾乾。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紫紅色斑點；再噴以10％氫氧化鉀溶液，斑點變藍色。
定量方法
取組合物適量，如果是固體，精密稱定，直接用適量水提取，如果組合物是液體，精密量取，蒸發除去溶劑後，用適量水提取，濾過，水洗殘渣，洗液與濾液合併，再加水適量，35±2℃溫熱備用；精密吸取0.5摩爾每升硫酸鋅標準溶液20毫升於500毫升容量瓶中，加0.025％甲基紅的乙醇溶液1滴，滴加氨水至溶液顯微黃色，將上述備用溶液緩緩併入容量瓶中，不斷振搖，加畢繼續振搖1分鐘，35±2℃加熱30分鐘，期間振搖數次，取出，冷至室溫，稀釋至刻度，搖勻後以乾燥濾紙濾過，棄去初濾液；精密吸取續濾液50毫升，置500毫升三角瓶中，加水300毫升，加pH為10的氯化銨-氨水緩衝溶液25毫升，鉻黑T指示劑0.1克，搖勻，用0.05摩爾每升乙二胺四乙酸二鈉標準溶液滴定，溶液由紫紅色轉為藍色為終點，並按下式計算：V＝MZN×20-MEDTA×VEDTA×10；其中0.1556為由試驗測得的比例常數；W為稱樣量。
對於用具體實施方式製得的膠囊，取樣量為10粒，傾出內容物，精密稱定，置500毫升三角瓶中，加水100毫升超聲提取30分鐘，濾過，水洗殘渣，洗液與濾液合併，再加水約至400毫升，濾液濃縮至約2毫升，作為供試液，35±2℃溫熱備用；精密吸取0.5摩爾每升硫酸鋅標準溶液20毫升，按上述定量方法隨後的步驟進行定量測定。
每粒糅質含量＝0.1556×V×平均裝量×1000/W；其中V＝MZN×20-MEDTA×VEDTA×10
W為稱樣量，0.1556為由試驗測得的比例常數。按具體實施方式製得的每粒膠囊中含糅質應不低於40毫克。按標準程式，對測定膠囊中糅質含量的方法進行方法學評價，結果如下：
1.重現性實驗：取同一批號樣品，精密稱定6份，分別測定糅質含量，結果如表1：
表1重現性試驗
從表1結果看，該測定方法具有良好的重現性，測定方法穩定。
2.回收率試驗
被測樣品已知含量為59.7毫克/粒，取樣5份，每份約0.5克，精密稱定，每個樣品加401毫克的純品沒食子酸對照品（稱取401.0毫克沒食子酸對照品，加水溶於100毫升量瓶中，精密量取10毫升加入樣品中），照含量測定法項下測其含量，結果見表2：
表2加樣回收率實驗表
從表2看，平均回收率為96.2％，表明此方法具有較好的可靠性，可用於控制產品中糅質含量。
3.陰性對照；取不含葉下珠的其他藥材提取物5克，同法測其糅質含量，取樣品5批，分別測得含量為：0.65％、0.80％、0.54％、0.56％、0.70％，平均為0.65％，表明該製劑中其它成分對君藥葉下珠糅質的含量影響較小，可以通過控制糅質含量來監控制劑的質量，從而保證藥品質量的可靠性。
臨床療效總結
採用具體實施方式製得的膠囊-B肝清膠囊進行臨床試驗。
一.一般資料60例病例，選自診斷為慢性B型肝炎的患者，診斷標準依據高等醫藥院校傳染病學的“病毒性肝炎”診斷標準。其中B肝病毒攜帶者32例，慢性遷延性B肝24例，慢性活動性B肝4例，男性33例，女性27例，年齡18-49歲，病程最短10個月，最長12年。治療前HBV標記物：HBsA克（+）者60例，HBeA克（+）者32例，HBV-DNA（+）者58例，肝功檢查：ALT＞40u者25例，膽紅素輕度升高8例，膽紅素大於85m摩爾每升3例，白蛋白及蛋白比值異常4例，查體：肝腫大11例，脾腫大5例。
二.治療方法採用B肝清膠囊，口服，每次5粒，每日4次，連服90天。
治療前查HBV標記物及肝功：HBsA克、HBeA克、抗HBcI克M、HBV-DNA（PCR）、谷丙轉氨酶、膽紅素、白蛋白及白蛋白/球蛋白比值，於治療第90天及停藥後90天分別檢查肝功能及HBV標記物各一次，記錄臨床症狀及肝脾大小情況。
三.臨床治療結果：治療第90天時，HBsA克60例轉（-）性21例（35％），HBeA克32例轉（-）性22例（71％），HBV-DNA58例轉（-）性46例（79％），肝功檢查：ALT＞40u降至40u以下者24例（96％），膽紅素8例輕度升高及白蛋白及蛋白比值4例異常者全部恢復正常。停藥後90天複查，另有2例HBV-DNA繼續轉為（-）外（82.8％），其餘與服藥第90天時血清指標和肝功檢查結果相同。
以上結果顯示，B肝清膠囊對B肝HBV標記物的清除及肝功能的恢復有顯著作用，對患者血清指標HBsA克、HbeA克、HBV-DNA均有明顯的轉陰作用。在用藥過程中，病人的主要自覺症狀，如肝瘀氣滯、肝腎陰虛所致的胸悶脅痛、肢體倦怠、肝區疼痛、口苦納差、失眠、脈弦細數、舌質紅嫩等症狀均有顯著的改觀。通過以上研究肯定了B肝清膠囊對B肝的治療作用。另外，還進行了B肝清的藥效學研究，選用鴨肝模型進行試驗，發現該品大劑量給藥後5天和10天，鴨血清DHBV-DNA顯著下降，P＜0.05-0.01。
榮譽表彰
2020年7月14日，《治療B肝的組合物》獲得第二十一屆中國專利獎優秀獎。
