樣品包埋

製備方法

在電鏡樣品的製備過程中有時需要平板包埋,例如進行免疫電鏡包埋前組織化學技術時一般需要先將組織做振動切片或冰凍切片,進行免疫組化反應後,再按常規脫水、浸透、最後置矽化過的載玻片上進行平板包埋。採用上述平板包埋法,首先要將載玻片經過清潔液浸泡叫流水沖洗→100%酒精浸泡→稍洗→10%NaOH浸泡2-3分鐘→充分流水沖洗,再用矽液(例如12%的Sigmacote,Sigma)浸泡12分鐘,烤乾製備成矽化玻片。其困難是矽液來源不便,

利用2%戊二醛固定液對生物組織樣品或細胞樣品等進行低溫固定，經0.2mol/L磷酸緩衝液沖洗後，按照50%→70%→95%→無水乙醇→絕對乙醇的乙醇梯度進行脫水，經環氧樹脂618滲透後進行包埋，然後加熱聚合，加熱溫度和時間為：35℃12小時→45℃12小時→60℃24小時。從而獲得了適合於原子力顯微鏡觀察的生物樣品包埋塊。本發明方法步驟較為簡單，所用試劑多為國產，易得且價格低廉，適合各種動物組織和細胞樣品的包埋塊製作。

製備過程

1取材 動作要快，部位要準確。組織塊要小，在0.5——1mm3，低溫下（4℃）操作。

2固定 取完材立刻投入3%戊二醛固定液中固定2小時或稍長一點時間

3清洗 用0.1M磷緩洗3次，每次10分鐘

4後固定 用1%OsO4（鋨酸）後固定2小時

5清洗 用0.1M磷緩洗3次，每次10分鐘

6脫水 50%乙醇15分鐘——→ 70%乙醇15分鐘或保留樣品時間稍長一些 ——→ 80%乙醇15分鐘 ——→ 90%乙醇15分鐘 ——→ 100%乙醇110分鐘換無水丙酮兩次，每次10分鐘

7浸透 丙酮：包埋劑 1：1 浸透1小時30分鐘 純樹脂浸透過夜

8包埋

9聚合 37℃（12小時）——→ 45℃（12小時）——→60℃（24小時）