植物體細胞雜交

簡介

重要進展

1960年，Cocking用酶法製備高等植物原生質體首次獲得成功；

1970年，Power首次用硝酸鈉進行為誘導劑進行了較大規模的原生質體誘導融合；

1971年，Nagata和Takebe首次從離體菸草原生質體培養中獲得再生完整植株；

1972年，Carlson首次獲得粉藍菸草和郎氏菸草的細胞雜種，這也是第一個植物細胞雜種；

1974年，Kao將聚乙二醇誘導融合法套用於植物細胞融合並建立了相應的融合技術；

1978年，Melchers獲得了第一個屬間細胞雜種（番茄+馬鈴薯）；

1981年，Zimmerman發明了電融合儀，並首次提出了電融合概念；

1987年，Schweiger建立了單對原生質體電融合技術程式！

1991年，R.Wiegand和R.W.Steubing等利用光鑷將大鼠的B-淋巴細胞與骨髓瘤細胞對接，形成預雜種，再利用UV雷射微束照射，使膜消失並完全融合，形成雜交細胞。

根據融合時細胞的完整程度，原生質體融合可分為兩大類：

對稱融合（symmetric fusion）－即兩個完整的細胞原生質體融合。

非對稱融合（asymmetric fusion）－利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質失活後再進行融合，它可以分為幾種：

用於細胞核或細胞質失活的方法分為物理和化學兩大類：

物理方法常採用射線處理，如X射線、射線等，它們能使細胞核失活；還有離心，振動，電激等。

化學處理目前常用的試劑有聚乙二醇（PEG）誘導融合，核失活－碘乙醯胺（IOA）、碘乙酸(Iodoacetate)；質失活－羅丹明（R－6－G，它是一種親脂染料，能夠抑制線粒體的氧化磷酸化過程而達到失活作用。

將植物細胞A與植物細胞B用纖維素酶和果膠酶處理，得到不含細胞壁的原生質體A和原生質體B，運用物理方法或是化學方法誘導融合，形成雜種細胞，再利用植物細胞培養技術將雜種細胞培養成雜種植物體。

①雜交時間：植物細胞雜交是從細胞融合開始，到培育成的新植物體結束。

a.原生質體製備：用酶解法去除細胞壁（纖維素酶和果膠酶）

b.原生質體融合：膜融合（高鈣、高pH誘導融合）、核融合（雜種細胞第一次有絲分裂時融合）

原生質體的融合

1．PEG誘導融合法

 PEG誘導融合的特點：其優點是融合成本低，勿需特殊設備；融合子產生的異核率較

高；融合過程不受物種限制。其缺點是融合過程繁瑣，PEG可能對細胞有毒害。