基因敲除分為完全基因敲除和條件型基因敲除（又稱不完全基因敲除）兩種。
條件型基因敲除是指通過定位重組系統實現特定時間和空間的基因敲除。噬菌體的Cre/LoxP系統、Gin/Gix系統、酵母細胞的FLP/FRT系統和R/RS系統是現階段常用的4種定位重組系統，尤以Cre/LoxP系統套用最為廣泛。
基本介紹
- 中文名：條件型基因敲除
- 別名：不完全基因敲除
對於許多有重要生理功能的基因來說，完全基因敲除往往導致胚胎死亡，有關該基因功能的研究便無法開展。而條件型基因敲除，特別是套用Cre/LoxP和FLP/FRT系統所開展的組織特異性敲除，由於其可調節性而受到科學家的重視。構建條件型基因敲除打靶載體時，常將正向選擇標記neo置於靶基因的內含子中，並在靶基因重要功能域兩側內含子中插入方向相同的LoxP位點。當實驗中需要消除靶基因活性時，與帶有Cre重組酶基因的ES細胞雜交，Cre重組酶就能把兩個LoxP位點中間的DNA片段切除，導致靶基因失活。標記基因兩側也常常帶有LoxP序列，因為許多時候即使標記基因位於內含子中也會阻斷靶基因的轉錄。一旦出現這種情況，可以用Cre重組酶表達質粒轉染中靶ES細胞，通過LoxP位點重組將neo抗性基因刪除。
以Cre/LoxP系統為基礎，可以在動物的一定發育階段和一定組織細胞中實現對特定基因進行遺傳修飾。利用控制Cre表達的啟動子活性或所表達的Cre酶活性具有可誘導性的特徵，人們常常通過設定誘導時間的方法對動物基因突變的時空特異性進行人為控制，以避免出現死胎或動物出生後不久即死亡的現象。
