末端標記核酸末端標記核酸就是一種末端標記的方法。
基本介紹
- 中文名:末端標記核酸
- 類型:末端標記的方法
末端標記核酸末端標記核酸就是一種末端標記的方法。
末端標記核酸末端標記核酸就是一種末端標記的方法。末端標記法:在大腸桿菌T4噬菌體多聚核苷酸激酶(T4PNK)的催化下,將γ-32P-ATP上的磷酸連線到寡核苷酸的末端上。要求標記的寡核苷酸5’端必須帶羥基。此法適用於標記...
末端標記,英文名end-labeling;end labeling,遺傳學概念,指代將放射性或非放射活性化學基團連線到多聚體末端的技術。末端標記的定義 定義1 如藉助多核苷酸激酶將ATP的γ位32PO4基團或克列諾酶將生物素標記的單核苷酸加到核酸的末端,以供作示蹤檢測等。定義2 在DNA或RNA鏈末端(3'或5'端)添加放射性或其他可檢測...
末端標記法指代將放射性或非放射活性化學基團連線到多聚體末端的方法。如藉助多核苷酸激酶將ATP的γ位32PO4基團或克列諾酶將生物素標記的單核苷酸加到核酸的末端,以供作示蹤檢測等。也可在DNA或RNA鏈末端(3'或5'端)添加放射性或其他可檢測的標記。為鑑定和檢測目的將標記物(如放射性同位素、螢光素或...
很易檢測。優點 核酸分子探針廣泛用於分子遺傳學研究。如索森和諾森雜交技術是篩選和分離基因的重要方法(見核酸分子雜交)。上述方法中以缺口移位標記法最為常用。末端標記法和化學標記法更適用於RNA,由於生物素標記無放射性污染,又無半衰期限制,操作簡便、價格便宜,所以套用廣泛。
在電泳前或電泳後,目的單鏈的5′端被去磷酸化並從[γ-32P]得到標記的磷酸基團,從而在體外被標記,T4噬菌體多核苷酸激酶催化這一反應。從頭合成探針法用來體外產生末端標記或均勻標記的DNA探針。末端標記的探針通過將寡核苷酸引物的5′端磷酸化而得到。均勻標記的探針通過放射標記的核苷酸引入正在合成的DNA單鏈得到。
核酸片段長度凝膠電泳圖譜法,核酸既含有呈酸性的磷酸基團,又含有呈弱鹼性的鹼基,故為兩性電解質,可發生兩性解離。但磷酸的酸性較強,在核酸中除末端磷酸基團外,所有形成磷酸二酯鍵的磷酸基團仍可解離出一個H+,其pK為1.5;而嘌呤和嘧啶鹼基為含氮雜環,又有各種取代基,既有鹼性解離又有酸性解離的性質,解離...
【用途】生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物;DNA的3'末端標記。功能 "末端轉移酶"催化的加上核苷酸至DNA分子的3'末端。不像大多數的DNA聚合酶,它不需要一個模板。這種酶的優選底物是3'突出端,但它也可以添加"核苷酸"(nucleotifes)至"鈍末端"(blunt end)或"凹陷的3'末端"(recessed 3' end)。鈷是一...
包括:5ˊ→3ˊDNA聚合酶活性、5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性、3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性DNApolⅠ套用⑴催化DNA缺口平移反應,製備高比活性DNA探針;⑵第二條cDNA鏈的合成;⑶對DNA3’突出末端進行標記;⑷DNA序列分析。E.coliDNApol.Ⅰ催化切口平移二Klenow片段(DNApol.大片斷)Klenow片段用途⑴補齊雙鏈DNA的3ˊ末端;⑵...
第三章 核酸雙向凝膠電泳 Rupert De Wachter和Walter Fiers 第四章 DNA序列分析 R.Wayne Davies 第六章 核蛋白的電泳 Graham H.Goodwin和Albert E.Dahlberg 附錄 1.引言 2.用於序列分析的RNA分離 3.RNA微克數量級的處理 4.序列分析用RNA的末端標記綜述 5.序列分析所用末端標記RNA的製備 6.序列分析前的...
此外,放射性同位素標記技術對分子生物學的貢獻還表現於:(1)對蛋白質合成過程中三個連續階段,即肽鏈的起始、延伸和終止的研究;(2)核酸的分離和純化;(3)核酸末端核苷酸分析,序列測定;(4)核酸結構與功能的關係;(5)RNA中的遺傳信息如何通過核苷酸的排列順序向蛋質中胺基酸傳遞的研究等等。為了更好地...
末端標記法不是將DNA進行全長標記,只在其5'端或3’端導入標記物進行部分標記。該標記方法可得到全長DNA探針,因為攜帶的標記分子較少,所以標記比活性不高。雜交方法 對任何DNA探針測定來說,雜交反應包括四個基本要素:探針、靶物質(樣品中的待測核酸)、檢驗方法(根據採用的標記物或報告基因而定)和雜交模式...
核酸探針標記 核酸探針根據核酸的性質,可分為DNA和RNA探針;根據是否使用放射性標記物的與否,可分為放射性標記探針和非放射性標記探針;根據是否存在互補鏈,可分為單鏈和雙鏈探針;根據放射性標記物摻入情況,可分為均勻標記和末端標記探針。下面將介紹各種類型的探針及標記方法。雙鏈DNA探針標記法 分子生物研究中,最...
③末端標記法(又叫尾標)。利用末端轉移酶可進行“尾標”,尾標適用於寡核苷酸探針標記,寡核苷酸探針多用於核酸“點”突變的檢測,該探針可用核酸合成儀人工合成,克隆出的探針一般較長,特異性好,標記量大,雜交的檢出信號強。探針合成的注意事項 ①合成探針的長短,一般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高,...
在核酸雜交的基礎上發展起來的一種用於研究和診斷的非常有用的技術稱探針技術(Probe)。一小段(例如十數個至數百個)核苷酸聚合體的單鏈,有放射性同位素如32P、35S或生物素標記其末端或全鏈,就可作為探針。把待測DNA變性並吸附在一種特殊的濾膜,例如硝酸纖維素膜上。然後把濾膜與探針共同培育一段時間,使...
常用的核酸探針標記方法有缺口平移法、末端標記法、隨機引物法和聚合酶鏈式反應法(PCR)等。核酸探針的檢測技術 主要有:①傳統印跡雜交法。將參加反應的一條核酸鏈固定在固體支持物(如硝酸纖維素濾膜、微孔板)上,另一條反應核酸鏈游離在溶液中的檢測方法稱為固相雜交法。傳統的印跡雜交技術是典型的固相雜交檢測法...
末端轉移酶在Mg存在下,選擇3′-OH端單鏈DNA為引物加成核苷酸,在Co存在下,選擇3′-OH端雙鏈DNA為引物加成核苷酸,形成多聚核苷酸尾。常用於核酸末端標記和核酸連線的互補多聚尾(連線器)。5、修飾酶 體內有些酶可在其他酶的作用下,將酶的結構進行共價修飾,使該酶活性發生改變,這種調節稱為共價修飾調節(...
在連線測序中,底物是 8 個鹼基的八聚體單鏈螢光探針,在5′末端分別標記了CY5、Teaxs Red、CY3、6-FAM這四種顏色的螢光染料。3′ 端的第 1、2 位鹼基類別排序分別對應著一個固定的螢光染料,第 3、4、5 位鹼基“n”是隨機鹼基,第 6、7、8 位鹼基“z”是可以和任何鹼基配對的特殊鹼基。③一次測序中...
PCR- REF 法將RFLP 和SSCP 技術優勢組合,將PCR 擴增的待測片段用5~ 6 種限制酶依次消化,混合併進行末端標記,最後經變性處理並在非變性凝膠上電泳分離,從而獲得來自片段長度和片段構象的雙重突變信息。變性梯度凝膠電泳 變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE) 利用由鹼基序列所決定的DNA...
DNA marker可以用放射性核素進行末端標記,通過這種方式,雜交後的標準分子量DNA也能顯影出條帶。(二) 基本步驟 1. 製備瓊脂糖凝膠,儘可能薄。DNA樣品與上樣緩衝液混勻,上樣。推薦使用的靶基因的上樣量見不同條件下上樣本的使用指針比較表。一般而言,對地高辛雜交系統,所需DNA樣品的濃度較低,每道加2.5-...
目前用螢光探針作為檢測信號的儀器,主要是考慮螢光標記所要檢測的DNA的效率,以及螢光探針本身的發光效率和光譜特性。PCR過程中的DNA標記 1.末端標記:在引物上標記有螢光探針,在DNA擴增過程時,使新形成的DNA鏈末端帶有螢光探針。2 .隨機插入:選擇四種緘機基,使其中一種或幾種掛有螢光探針,在PCR過程中,帶有...
凝膠滯緩實驗(DNA mobility shift assay,EMSA),是一種檢測蛋白質和DNA序列相互結合的技術。實驗原理 其基本原理是蛋白質可以和末端標記的核酸探針結合,電泳時這種複合物比沒有蛋白結合的探針在凝膠中泳動速度慢,表現為相對滯後。套用領域 該方法可以用於檢測DNA結合蛋白、RNA結合蛋白,並可通過加入特異性的抗體來...
這種方法簡便、快速,而且標記均勻。另外一種方法為酶促標記法,是在酶促反應條件下,將預先標記的核苷酸分子摻入核酸探針分子中去。一般常規使用的標記方法為缺口平移法和隨機引物法,對於人工寡聚核苷酸則採用末端標記法。隨著PCR技術的出現,多採用PCR技術,在利用引物擴增核酸探針的同時將探針標記,是一種快捷、方便...
T4核苷酸激酶廣泛用於DNA和RNA的5'末端標記,標記時以[y-"P]ATP作為底物。採用轉移反應可獲得高水平的末端標記,但反應前必須除去5'端未標記的磷酸基。5'端標記的DNA和RNA可用於:核酸的定序分析、部分酶切法繪製限制酶圖譜、DNA或RNA的指紋分析、經DNase或甲基化保護的DNA足跡分析(DNA-footprinting)及分子雜交研究...
細胞凋亡晚期中,核酸內切酶在核小體之間剪下核DNA,產生大量長度在180-200 bp 的DNA片段。對於晚期檢測通常有以下方法:1、TUNEL(末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記)2、LM-PCR Ladder (連線介導的PCR檢測)3、Telemerase Detection (端粒酶檢測)生化方法 1、典型的生化特徵:DNA 片段化 2、檢測方法...
①末端標記的三磷酸核苷核供體(通常是ATP,有時用GTP)中的磷酸基團轉移到蛋白質或肽底物上;②將磷酸化的底物分離出並進行定量分析。前者通常在溶液中進行,酶和底物均在液相中。後者為了去除游離的標記核苷酸,通常需要用三氯醋酸沉澱、SDS-PAGE分離或使標記底物結合於纖維素膜上。有時可將酶或底物固定於固相載體上...
將此探針的5’末端標記上32P。雜交方法採用液相雜交法,即在液相中將靶DNA變性解鏈,然後與探針退火,產生雜交體。如靶DNA為βA型,則兩條鏈完全互補,並產生DdeI的酶切位點;如待檢DNA為βS型,則所形成的雜交體中兩條鏈在突變鹼基處不配對,從而不能被DelI所識別。用DelI消化雜交DNA,顯然βA會被切開而βS...
5 原位末端標記技術 細胞凋亡時,DNA 斷裂早於形態學改變及DNA 含量減少,原位末端標記( ISEL) 是將滲入到凋亡細胞中的外源性核苷酸在酶和DNA 的催化下與凋亡細胞因內源性核酸酶的激活而產生的單股或雙股斷裂相結合,較前述方面具更高靈敏性。通常有兩種方法: ①DNA 聚合酶I 或klenow 大片段介導的單位缺口平移...
分子信標(Molecularbeacon)是一種螢光標記的寡核苷酸鏈。一般有三部分組成:① 環狀區:由15~30個可以與靶分子特異結合的核苷酸組成;② 莖幹區:一般由5~8個可發生可逆性解離的鹼基對組成;③ 螢光基團和淬滅基團:分子信標的兩個末端分別標記螢光基團和淬滅基團。如概述圖所示,沒有靶分子的時候,分子信標的...
阮一駿教授,其研究組一直從事基因組空間結構方面的研究,曾建立了世界先進的基因組學研究方法體系——全基因組雙末端標記測序系統(Paired-End-Tag,簡稱PET)。真核生物的染色體是由一系列各自獨立,又高度有序的染色質結構域構成。這些結構域就是一些獨立的基因表達調控單位,在真核生物的基因表達調控扮演著重要的...
交第三方合成引物並在末端標記螢光,不同大小片段採用不同顏色螢光標記,進行多重聚合酶鏈反應(PCR),使得所有靶點的核酸片段都帶螢光標記。產物預處理後,進行毛細管電泳,利用螢光檢測器對不同片段大小的產物進行識別和區分。使用軟體分析數據來決定以下結果:(1) 大小:分析軟體利用每種樣品中的標準尺寸為每種...