新的細胞自噬相關基因TMEM74的作用機制研究

《新的細胞自噬相關基因TMEM74的作用機制研究》是王露為項目負責人，北京大學為依託單位的面上項目。

基本介紹

• 中文名：新的細胞自噬相關基因TMEM74的作用機制研究
• 項目類別 ：面上項目
• 項目負責人：王露
• 依託單位 ：北京大學

結題摘要

獲得了資金資助後，在原有的工作基礎上，利用間接免疫螢光技術進一步確定了內源性的TMEM74的亞細胞定位。建立和完善了檢測TMEM74引起細胞自噬和細胞凋亡的形態學和生化指標。我們觀察了TMEM74超表達對溶酶體的效應，檢測了cathepsin B的表達水平以及釋放情況，並用siRNA技術敲減cathepsin B，觀察了細胞的變化情況。對線粒體的功能進行了檢測，觀察了敲減TMEM74對細胞凋亡和自噬的影響。我們套用了caspase3的抑制劑抑制了caspase3的活性，然後超表達了TMEM74，證明TMEM74誘導的細胞死亡不是caspase依賴的，而是自噬性的細胞死亡。接著我們對TMEM74的作用機制進行了研究。我們研究了TMEM74的相互作用分子，首先通過酵母雙雜交尋找其相互作用分子，我們找到了Bik可能和TMEM74的相互作用分子，接著對其目標分子進行了進一步驗證，通過雷射共聚焦顯微鏡和免疫共沉澱實驗初步驗證了與TMEM74的相互作用分子，並對它們在功能上的相互作用進行了檢測。 在項目的完成過程中基本是順利的，但是在TMEM74文章的發表過程中不是很順利。目前仍在投稿中。在該項基金的資助下，我們目前共發表了2篇文章，分別是發表在細胞與分子免疫學雜誌上的“人類新基因CTRP4的原核表達及多克隆抗體的製備 ”和發表在Cancer Letters上的Identification of C1qTNF-related protein 4 as a potential cytokinethat stimulates the STAT3 and NF-jB pathways and promotes cell survival in human cancer cells.

項目摘要

TMEM74（Transmembrane protein 74）基因是本實驗室在國際上首次證實與細胞自噬相關的人類新基因。我們初步的研究結果發現TMEM74定位於細胞的溶酶體和自噬泡，其在細胞內的超表達能夠誘導細胞發生自噬，抑制其內源性基因表達可以抑制飢餓誘導的細胞自噬。相關功能的文章已經發表在BBRC上。本課題將藉助於生物信息學、分子生物學、細胞生物學、siRNA技術、酵母雙雜交、免疫共沉澱、蛋白質組學等技術，深入探討TMEM74的分子結構和功能，研究TMEM74對細胞凋亡以及細胞自噬的雙重調控作用以及相互作用關係，闡明TMEM74作用的分子機制和信號轉導途徑，鑑定出相互作用的蛋白分子,為TMEM74 潛在的臨床套用奠定基礎。