《新的潛在癌基因NOVA1在肝癌中的表達及其功能研究》是依託復旦大學，由劉韜韜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新的潛在癌基因NOVA1在肝癌中的表達及其功能研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉韜韜
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
尋找腫瘤新的相關基因和治療分子靶點是腫瘤研究領域的一個熱點。拷貝數變異（CNV）是最近才受到廣泛關注的一類遺傳變異，被發現與多種疾病發生相關包括腫瘤。課題組前期套用美國Affymetrix 公司500K高通量基因晶片，對肝癌患者的全基因進行了掃描，發現在14q12有一CNV片段在肝癌病例中明顯增加(OR＞5)，擴大樣本和實時PCR重複驗證證實肝癌患者存在此段拷貝數變異,並發現此CNV片段相關基因NOVA1在肝癌組織中表達明顯高於癌旁組織。本課題擬在上述研究的基礎上，通過對臨床肝癌組織標本中NOVA1基因的表達研究，分析其和肝癌發生、發展以及與預後的關係；同時通過肝癌細胞株研究NOVA1基因過表達和抑制表達後其生物學特徵的改變（細胞增殖和凋亡，克隆形成、遷移和裸鼠體內成瘤等）。希望能明確NOVA1基因在肝癌發生、發展中的臨床意義和潛在功能，初步證明NOVA1基因是肝癌發生相關的新的易感基因。
結題摘要
腫瘤神經腹側抗原-1 (Neuro-oncological ventral antigen-1，Nova1) 基因是一種中樞神經系統特異性的RNA結合蛋白。其作為一種神經系統的自身抗原，首先在副腫瘤性斜視眼陣攣-肌陣攣共濟失調患者中被發現。一些研究已經發現Nova1在惡性腫瘤細胞中有表達。但至今未有研究報導關於Nova1在肝細胞肝癌中的表達。本研究分三部分探討了Nova1在人肝癌組織中的表達情況及同時通過各種體內體外實驗了解Nova1基因在肝癌發生、發展中的臨床意義和潛在作用機制，初步證明了Nova1基因是肝癌發生相關的新的易感基因。1.Nova1在人肝癌組織中的表達及與患者臨床病理特徵的關係：我們採用免疫組化法檢測了Nova1在91例肝癌組織和配對癌旁組織中的表達，同時我們隨機選取了四對肝癌和癌旁組織，提取組織蛋白後通過免疫印跡法檢測Nova1蛋白表達量。免疫組化及免疫印跡法均提示Nova1在肝癌組織中的表達水平高於配對癌旁組織。進一步結合臨床隨訪資料後發現肝癌組織Nova1陽性表達是影響總生存率 、至復發生存率 、早期復發的獨立危險因素。Kaplan-Meier生存曲線顯示，癌內高表達Nova1的患者OS和TTR要顯著低於低表達組。而癌旁Nova1高表達患者OS和TTR與低表達患者相比無明顯差異。這一部分研究提示，Nova1可能與HCC患者預後相關，在HCC的轉移復發中起一定作用。2.Nova1誘導型表達載體的構建及體外對肝癌細胞生物學行為的影響：我們進一步構建和驗證了Nova1干擾和過表達的誘導型載體的單克隆細胞株。誘導型表達載體是通過強力黴素來誘導基因的過表達和下調。隨後通過一系列體外細胞功能實驗，進一步證實了與對照組相比，Nova1下調後，其肝癌細胞的遷移和侵襲能力能明顯減弱；另一組，過表達Nova1後細胞增殖和遷移能力相比於對照組明顯增強。提示Nova1可能是通過調控肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力，從而促進了肝癌細胞的增殖及術後的復發。3. 體內Nova1對肝癌細胞生物學行為的影響及其促進肝癌發展的潛在機制探討：我們首先行裸鼠體內皮下成瘤實驗。實驗結果提示，Nova1過表達對肝癌腫瘤具有促進生長的作用，而相反下調Nova1能夠抑制肝癌腫瘤生長。進一步查閱相關文獻，我們選擇Nova1參與的可變剪接GABAA受體γ2(GABAARγ2) 進行深入研究。免疫組
